液相色谱仪是常用的实验室仪器设备，在使用中经常会遇到这样或那样的问题，给实验人员带来了一定的困扰，对此，仪多多整理了5个常见的问题及答案，可供参考！
一、问：
做的黄酮苷，用甲醇+乙腈+四氢呋喃+醋酸(1:1:19.4:78.6)溶液做流动相，现在分离效果不理想，想延长保留时间看看怎么样，也就是增大流动相的极性!PS：用的C18柱。
答：
用液相色谱，C18柱分离黄酮苷，不是太清楚为什么要选用甲醇+乙腈+四氢呋喃+醋酸这样一种很复杂的流动相体系，难道体积分数78.6%的醋酸是直接用的冰醋酸?这是一种很不可思议的流动相配比。建议直接使用甲醇-水，或是乙腈-水作为流动相，水相中可以适当加点甲酸或是乙酸来得到较佳分离效果。
二、问：
苯甲酸的测定中流动相走了很久，进样以后，保留时间还是变，难道这个项目的柱子这么难平衡么?
答：
保留时间一直在变，说明系统没有平衡好，可以从多个方面去排查原因。
1、流动相可能是最主要的原因，流动相平衡时间是否充足，管路有没有气泡，流动相中有机相是否蒸发，比例阀工作是否正常?
2、泵有可能存在问题，输液是否正常，压力是否稳定，泵密封垫是否完好，是否有漏点?
3、色谱柱也需要排查，是否恒温，是否有漏液?
三、问：
液相色谱中影响峰扩散的有那些因素?与气相色谱相比，有哪些不同之处?
答：
气相色谱与液相色谱在速率理论方程上的差异主要是由于气体与液体的性质差异造成的。液体的黏度比气体大约100倍，表面张力大约10000倍，密度大约1000倍；气体还具有高压缩性系数。溶质在液体中的扩散系数要远远小于在气体中，液相在传质过程中对理论塔板高度的影响尤其的大。与气相色谱速率理论方程不同的是，液相色谱增加了固定相孔结构内滞留流动相传质项。
四、问：
pH值不同出峰时间不同，具体原理是什么?除了pH值会影响，还有其他因素吗?
答：
流动相的pH值主要是影响到分配系数而出峰时间的不同。
影响出峰时间的因素有很多，从分配系数、容量因子等各个方面考虑，与目标化合物在固定相和流动相中的分配性质有关，还与流速，压力，柱温等液相色谱仪参数有关，具体涉及下面几种因素的影响：
1、目标化合物本身，具体包括分子量、结构、化合物类型、极性等；
2、流动相，具体包括流动相构成、配比、流动相各组分极性，洗脱方式，流速等；
3、固定相，具体包括固定相种类，结构，色谱柱长度等；
4、分配系数与容量因子，具体包括化合物在流动相与固定相之间的分配情况，柱温等。
五、问：
现在用液相色谱做含量测定时，保留时间太长，20分钟左右才出峰，有没什么方法提前，原理是什么?
答：
可以从通过改变目标组分容量因子k的方式，以及缩短柱长增加柱温等方式，具体可以采取以下方法：
1、调整流动相，具体包括流动相构成、配比、流动相各组分极性，洗脱方式，提高流速等；
2、调整固定相，具体包括固定相种类，结构，缩短色谱柱长度等；
3、增加柱温，降低流动相传质阻力等。
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