二氧化碳培养箱是进行细胞培养的必要设备,那么在培养细胞时有哪些经验是我们可以借鉴的呢?下面让我们一起来看一下。
1、启蒙老师的重要性
一般进实验室都有师兄师姐带着做,他们就是你做细胞的启蒙老师。他们的操作手法、细节、理论讲解就成了你操作的准则,如营养液、细胞瓶的摆放位置;灭菌处理程序;开盖手法;细胞吹打手法等等。要学会他们的正确操作,在第一次的时候就要重视。
2、像养孩子一样养细胞
细胞真的很脆弱,可以每天都去看看它,以防止出现培养箱缺水、缺二氧化碳、停电、温度不够等异常现象,也好及时解决这些意外,避免重复实验带来的更大痛苦。
3、好细胞要及时保种
细胞要分批传代,这样即使有一批出了问题,还有一批备用的。像后者一般人可能不容易做到。有一次细胞污染了,全军覆没。当时可后悔没有保种。
4、每种细胞都有自己的特性
细胞跟人一样,不同的细胞,培养特性是不一样的。培养过程中要细细体会。不同细胞株使用不同的培养基和血清。
如平滑肌细胞很活跃,喜欢热闹,2~3 天就好多人口,而且不太爱吃喝,真是可以养的孩子了。内皮细胞和平滑肌细胞性格相近,不过它很不讲卫生,也很邋遢,里面有很多分泌屋,要经常换洗才行。RAW264.7 细胞也很开朗,而且很能吃,要经常喂它,头疼的是细胞很容易活化,培养它的瓶子和环境没有内毒素才好。
5、培养前的工作准备充分
包括耗材的处理、试剂的配置,无菌检验等等。
玻璃器皿的清洗。对于玻璃器皿(细胞瓶、装营养液的瓶子、小青霉素瓶等)要先用洗衣粉刷干净(注意死角),然后冲干净。用酸液浸泡 24 h 以上,之后用清水冲洗 10 遍,除去残留酸液。瓶子之类,冲洗过程要使劲摇晃。然后在双蒸水浸泡 24 h。晾干后包扎,160℃ 干烤 2 h 待用。
试剂配置。细胞培养用的液体一般使用双蒸以上的水即可。并注意 pH 值的调节。
无菌检验。主要采用过滤除菌:如胰酶、抗生素、G-418 溶液、各类培养基、丙酮酸钠、谷氨酰胺等。有些可以采用高压灭菌:如 PBS、D-Hank's等。
6、试剂分装保存
包括营养液、胰酶、血清等。
血清特别重要。血清必须贮存于 –20℃,如果一次无法用完一瓶,可将 40~50ml 分装于无菌酸处理瓶中,甚至置青霉素瓶保存。一般厂商提供的血清为无菌,不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物,则可将血清加入培养基内一起过滤,勿直接过滤血清。(一般情况下不影响细胞培养)
瓶装血清一定要逐步解冻: 4℃ 冰箱全溶后再分装,在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沉淀的发生。勿直接由 –20℃ 直接至 37℃ 解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
热灭活是指 56℃,30 分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到 56℃后,将血清放入,待温度升高到 56℃ 后计时,一般 5 分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须,一般不要作此热处理,因为会造成沉淀物之显著增多,且会影响血清之品质。注意更换新血清(包括不同批次)对细胞的影响。
7、无菌意识要强
实验进行前,超净台以紫外灯照射 30 分钟灭菌,以 70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面,并开启超净工作台风扇运转数分钟后,才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株,以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后,将实验物品带出工作台,以 70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。
无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞,必要物品,例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置,其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以 70% 乙醇擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域,一般勿在边缘区域操作。
小心取用无菌之实验物品,避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口,亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后,以手夹住瓶盖并握住瓶身,倾斜约 45° 角取用,尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
8、选择正确的培养基
不同的细胞可能培养基不同,甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞,有文献就选用 neurobase 培养基,而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的,而这种培养基中含有抗氧化剂成分,此时,我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。
二氧化碳培养箱是通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细胞/组织在生物体内的生长环境。
二氧化碳培养箱的三个工作原理:
一、湿度的控制
因培养物需工作室内保持一定的湿度时,二氧化碳培养箱配有水盘。用户可在培养时将水盘放入工作室内,水盘加上适量的蒸馏水让其在工作室内自然蒸发,一般相对湿度可达95%。
二、温度的控制
二氧化碳培养箱温度控制器由铂电阻作为传感器与数字控制电路、LED数字显示电路等组成,当传感器输出与温度成正比的电阻信号转换成电压信号经电路放大后,一路送至显示电路显示实测温度。另一路送至比较器与设定值比较。当二者产生偏差时,触发可控硅功率管输出功率使加热管产生热量。当偏差减小直至为零时,其加热管发出的热量亦随之减小,直至停止加热。控制线路中有超温及水位报警功能。当显示温度超过设定值2.0℃时,温度控制器发出声光报警信号,同时切断输出,停止加热,防止温度继续上升;当水箱内水位过高或过低时,水位控制器发出声光报警信号,同时切断加热输出。仅水套式CO2箱具有水位报警功能!
三、气路的控制
气路由高浓度的CO2钢瓶、气泵、稳压阀、针型阀,电磁阀、流量计及储气瓶等组成。(高浓度的CO2钢瓶由用户自备)。当输入一定压力的高浓度CO2气体,通过调节阀、针阀及电磁阀的流量、时间控制,保证一定量的CO2气体进入工作室,达到自动控制工作室内的CO2浓度值。该值同时通过显示电路显示,便于观察了解。为方便用户在使用中进行浓度的监视和采样,在CO2箱的后背面装有采样、监视口。因采用了快慢速双重充气法,使CO2箱在开、关门后,工作室内的CO2浓度能快速恢复且无过冲现象。在CO2箱工作过程中,由储气瓶对工作室内进行补气,以保持稳定的CO2浓度值。
CO2培养箱广泛应用于医学、免疫学、遗传学、微生物、农业科学、药物学的研究和生产,已经成为上述领域实验室较为普遍使用的常规仪器之一;
一是要求二氧化碳培养箱能够对温度、二氧化碳浓度和湿度提供精确稳定的控制,以便于其研究工作的进展;
二是要求二氧化碳培养箱能够对培养箱内的微生物污染进行有效的防范,并且能够定期消除污染,以保护研究成果,防止样品损失。
所以,选购二氧化碳培养箱关心的当然就是其高可靠性、对污染的防范和控制及使用方便。
二氧化碳培养箱的性能特点:
采用国内流线型圆弧型设计,外壳采用冷轧钢板制造,表面静电喷塑;
本机温控系统采用微电脑单片机技术,温控、定时、超温报警;
二氧化碳控制方式为配气式;
选用进口离心风机,具有噪音低,寿命更长。配于合理的风道结构,使培养箱加热升温快且均匀性好;
显示方式为双屏高亮度数码管显示,示值准确直观、性能优越,触摸式按键设定调节参数;
温度控制具有超温声光报警功能,具备两套控制系统,当主控系统失效时,副控系统起监控作用;
采用微电脑自动抑制控制系统,可有效避免培养过程中打开箱门造成内腔温度波动度大;
采用门加热控制系统,可有效避免内玻璃门结露现象;
采用双重密封门结构,外门采用磁性门封条结构,内室玻璃门与箱体采用硅密封条,密封性好,避免污染又便于观察;
工作室内搁架可随用户要求任意调节高度及搁架数量;内胆均为镜面不锈钢材料制成。半圆式四角设计方便清洁。