(1)照明:
室内照明要光线适中,避免阳光直射。为避开直射光线对仪器操作、观测的影响,仪器(显示屏)应侧向光线。实验室窗户要挂窗帘,以便随时调节光照强度。
(2)通风:
使用液相色谱仪分析过程中,由于流动相中含有挥发性有机溶剂(甲醇、乙睛等)会产生有害气体,对仪器中的光学元件带来腐蚀,应注意仪器室的通风,以排除室内有害气体、保持空气清新。
通风主要有两种方式:一种自然通风,定时打开门窗,让内外空气对流;另一种是强制通风,如用通风柜、排风扇等,及时将有害气体排出室外。
(3)环境温度和湿度:
适宜的温度和湿度是保障HPLC仪正常运行、性能稳定的必要条件。
HPLC仪一般要求室温在20一30℃之间,日温度变化2一3℃,不要波动太大,否则,在开机分析时会影响色谱分离;
夏季一定要控制室温不要超过30℃,温度太高会使流路系统产生气泡,影响检测器的正常工作(如荧光检测器)。室内相对湿度应控制在60%以下。
(4)供电:
液相色谱室应设有照明电源和动力电源,动力电可供仪器运行使用。为减少噪音的干扰,仪器应远离瞬时供电的大功率电器设备,如:大型电动设备(超低温冰箱、电烤箱等)、电梯、空调系统等。为保证HPLC输液泵的精度,必须要保证稳定的输人电压,为此,建议色谱室应设有和仪器负荷相当的稳压电源。室内墙上应安装有接地电阻符合要求的地线,用于仪器设备保护性接地的公用地线接地电阻≤4Ω。
(5)洁净度:
悬浮于空气中的颗粒物质会对色谱仪器分析带来干扰,使本底和噪声升高,成为分析测试的污染源,直接影响高纯物质的纯度与痕量杂质的分析。
早期使用隔膜和停流进样器,装在色谱柱进口处。现在大都使用六通进样阀或自动进样器。
进样装置要求:密封性好,死体积小,重复性好,保证中心进样,进样时对色谱系统的压力、流量影响小。HPLC进样方式可分为:隔膜进样、停流进样、阀进样、自动进样。
1.隔膜进样。
用微量注射器将样品注进专门设计的与色谱柱相连的进样头内,可把样品直接送到柱头填充床的中心,死体积几乎即是零,可以获得较佳的柱效,且价格便宜,操纵方便。但不能在高压下使用(如10MPa以上);此外隔膜轻易吸附样品产生记忆效应,使进样重复性只能达到1~2%;加之能耐各种溶剂的橡皮不易找到,常规分析使用受到限制。
2.停流进样。
可避免在高压下进样。但在HPLC中由于隔膜的污染,停泵或重新启动时往往会出现“鬼峰”;另一缺点是保存时间不准。在以峰的始末信号控制馏分收集的制备色谱中,效果较好。
3.阀进样。
一般HPLC分析常用六通进样阀(以美国Rheodyne公司的7725和7725i型常见),其关键部件由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成。由于阀接头和连接管死体积的存在,柱效率低于隔膜进样(约下降5~10%左右),但耐高压(35~40MPa),进样量正确,重复性好(0.5%),操纵方便。
4.自动进样。
用于大量样品的常规分析。
几乎所有液相色谱仪接头故障都是可以避免的,按下列要求可以有效地预防接头的故障。
1、使用液相色谱仪仪器设计时的部件。
不同厂家连接管伸出刃环的长度不完全相同,混用容易导致漏液、螺纹损坏、色谱柱进出口及检测器进液口螺母破坏等,连接管在螺母中没有良好密封也会导致漏液、死体积增加等。建议可以不要互换使用不同厂家生产的接头和刃环。
2、按要求组装和拧紧接头,不可拧得过紧。
低压接头的故障主要有接头松动、管头损坏、螺纹“滑丝”、拧过头。低压接头用手上紧,加上锁紧螺丝可减少以上故障的发生,一旦发现低压接头损坏,应重新换新的。高压接头的故障与低压接头差不多,污染和装置不当也常有发生,
3、使用合适的工具。
在拧紧接头的时候一定要仔细,过紧可能会损坏螺纹、刃环等,引起漏液,最糟糕的是会使接头断在螺母内部。使用手拧紧接头,不需要任何工具就可以密封。旋紧接头时可以要用死扳手,不用活扳手,保证不损坏接头。
4、接头的清洁。
组装与拆卸接头时要检查在密封面上有无微粒和无机盐晶体。这些污染物影响密封性能,更严重的会使螺丝咬死。
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