由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。废液流入废液瓶。遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而高效液相色谱仪改变的是流动相极性，使样品各组分在较佳条件下得以分离。
1、众所周知，液体对于气体是有一定的溶解度的。液体的压力越高，对气体的溶解度越好。所以，当一瓶未开封静置的可乐，你是看不到气泡的，因为气泡都溶解在里面了。当你开启瓶盖，直接的影响就是瓶子里面的压力降低了，对气体的溶解度变小，所以气体就析出变成一个个的小气泡。
2、喝过啤酒或者碳酸饮料的人都有这样的经历，当你摇晃瓶子，然后瞬间把瓶盖开启，啤酒或碳酸饮料瓶中会喷出大量泡沫，摇晃的越剧烈，喷射的越猛，不难看出，溶解气体的液体在振荡和运动过程中，也容易让气泡析出。
3、上学的时候，化学课上，我们曾经怀疑过一个问题：把一升甲醇倒进一生纯水里面，高效液相色谱仪的体积是不是两升？当我们亲自试验后，就排除了这个疑问，而且我们可以明显看到，当两种液体混合的时候，会有大量的气泡冒出，体积也小于两升。
高效液相色谱仪分析中，选择流动相时应考虑流动相与填料的作用、纯度、与检测器的匹配、粘度、对样品的溶解度和样品回收等方面。
1、流动相与填料的作用：
流动相应不改变填料的任何性质。
低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。
碱性流动相不能用于硅胶柱系统。
酸性流动相不能用于氧化铝和氧化镁等吸附剂的柱系统。
2、纯度：
色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。
3、与检测器的匹配：
当使用UVD时，所用流动相在检测波长下应没有吸收或吸收很小。
当使用RID时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。
4、粘度：
高粘度溶剂会影响溶质的扩散和传质，使柱效降低，还会使柱压增加，分离时间延长。尽量选择沸点在100℃以下的流动相。
5、对样品的溶解度：如果溶解度欠佳，样品会在色谱柱内沉淀，不但影响纯化分离，而且会使色谱柱恶化。
6、样品回收：应选用挥发性溶剂。
高效液相色谱仪分析选择流动相时应注意的问题：
1.尽量使用高纯度溶剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。不纯的溶剂会引起基线不稳，产生伪峰。
2.避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降和损坏色谱柱，如使固定液溶解流失和酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。
3.样品在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。
4.流动相粘度低（粘度适中）。若使用高粘度溶剂，会增高压力，不利于分离。常用低粘度溶剂有丙酮、甲醇和乙腈等。但粘度过低的溶剂也不宜采用，如戊烷等，它们容易在色谱柱和检测器内形成气泡，影响分离。
5.化学稳定性好。
6.流动相应满足检测器的要求。
对于紫外吸收检测器，应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长长。所谓溶剂的紫外截止波长是指当小于截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的，会严重干扰组分的吸收测量。
对于示差折光检测器，要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，以达到zui高灵敏度。
液相色谱仪，看你分离的样品的种类，看流动相是否和样品互溶，分离程度，一般加水多少，甲醇，乙腈很多种，看样品的沸点，溶解性。
高效液相色谱仪分析中待测样品的制备流程高效液相色谱仪分析样品的种类繁多、物理形态广泛、组成及其浓度复杂多变，对分析结果的干扰因素很多，为达到分析目的，样品要进行有效的制备。高效液相色谱仪分析样品的制备包括预处理、提取、净化和浓缩等过程。
一、预处理：
1、固体样品：含水较低，粉碎过筛。含水量较高，取使用部分烘干后，粉碎过筛。
2、液体样品：搅拌混合均匀。
3、特殊样品：根据实验要求进行特殊处理。
二、提取：
1、浸提法（固-液萃取法）：将样品浸泡在溶剂中，把固体样品中的某些组分浸出。
2、萃取法（液-液萃取法）：利用被提取组分在互不相溶的两种溶剂中分配系数的不同实现分离。
三、净化：
1、萃取法：适用于液体样品，少量多次。
2、化学法：通过使杂质或待测物发生化学反应而改变其溶解性，使其与原体系分离。
3、层析法：利用混合物中各组分理化性质的不同，使各组分在支持物上的移动速度不同，而将各组分分离。
四、浓缩：
1、常压浓缩：通过升高温度，将溶剂由液态转化成气态被抽走，从而达到浓缩目的。适用于挥发性和沸点相对较低的样品。
2、减压浓缩：通过抽真空，使容器内产生负压，在不改变样品化学性质的前提下降低样品的沸点，使一些高温下化学性质不稳定或沸点高的溶剂在低温下由液态转化成气态被抽走，从而达到浓缩目的。
3、冷冻干燥：冷冻的同时抽真空减压，使溶剂升华。适用于生物活性样品。
4、氮吹仪浓缩：采用氮气对加热样品进行吹扫，使样品迅速浓缩，达到快速分离纯化的效果。适用于农残检测和制药行业等样品的批量处理。
希望以上内容对您有所帮助，如还有疑惑请致电厂家进行咨询。
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