液相色谱仪的日常操作条件:温度:10-40℃;相对湿度<80%;可以是恒温、恒湿,远离高电干扰、高振动设备,使用后液相色谱仪检测器的保养对液相色谱仪的使用寿命影响至关重要。
微小的颗粒杂质或薄膜沉积在流通池里,会导致基线噪声的增加或降低灵敏度。此时必须进行清洗处理。一般常规清洗不必拆下流通池,可直接在流通池入口处(即检测器输入端),接上一个专用的注射器接头,依次用去离子水、酒精和3MHNO3冲洗流通池,最后用去离子水反复冲洗数次。检测器出口用玻璃瓶盛接流出的废液。
若检测器已长期使用或受到高浓度样品的污染,经上述方法还不能除去污垢,就得取下流通池,液相色谱仪检测器的保养按以下步骤拆开进行清洗:
1)卸下紫外检测器侧面遮盖流通池的盖板,松开固定流通池支架的螺钉,小心地取出流通池支架。
2)拆下连接流通池输入、输出端的不锈钢导管(或PEEK导管),卸下流通池体。仔细拧下石英窗和透镜的护圈。小心取下垫圈、石英窗、透镜、护圈,放在一个盛有乙醇的烧杯内,用超声波清洗机处理5min~10min。
3)用蒸馏水、乙醇冲洗流通池,并用超声波清洗,最后用去离子水冲洗数次,除去池内杂物。
4)烘干各部件(注意:避免用手直接接触透镜及石英窗)。
5)重新装配流通池体。
6)按原样装在流通池支架上,并接好导管,并进行试漏。(方法:池体输入端与恒流泵连接,开启恒流泵(流动相用蒸馏水),视各密封点及石英窗口是否有漏液溢出。
7)装入紫外检测器机箱内,盖上盖板,并用原螺钉、螺帽固定。
注:上述液相色谱仪检测器的保养拆洗应有经培训过的专业维修人员进行。
在高效液相色谱仪分析过程中,缓冲液是不可或缺的,因为要用它来调节流动相的pH值,缓冲盐使用不当,后果可是吃不了兜着走。比如说,液相色谱仪的色谱柱压升高、柱效下降、保留时间异常等等不良影响:
1、柱压升高;
原因:缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出,堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙,阻碍流动相传质,引起柱压升高。
2、相同化合物的保留时间发生变化;
原因:如果没有冲洗干净就进行进样,色谱柱内含有的盐会使化合物的保留时间发生变化.
3、柱效下降;
原因:
i、有些缓冲盐会渗入到键合相的深处,损害硅胶基体,导致色谱柱键合相流失,柱床变松,柱效下降;
ii、凝结在键合相表面,使C18碳链难以舒展,对物质的保留能力下降,导致柱效下降。因此液相色谱仪用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗,水中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。
高效液相色谱仪是实验中常见的仪器之一,色谱柱的灵敏度是确保实验准确性的重要原因,那么当色谱柱的灵敏度不够时,我们该如何去解决呢?应该从以下几个方面去分析:
1、样品量不足:解决办法为增加样品量
2、样品未从色谱柱中流出:可根据样品的化学性质改变流动相或柱子
3、样品与检测器不匹配:根据样品化学性质调整波长或改换检测器
4、检测器衰减太多:调整衰减即可。
5、检测器时间常数太大:解决办法为降低时间参数
6、检测器池窗污染:解决办法为清洗池窗。
7、检测池中有气泡:解决办法为排气。
8、记录仪测压范围不当:调整电压范围即可。
9、流动相流量不合适:调整流速即可。
10、检测器与记录仪超出校正曲线:解决办法为检查记录仪与检测器,重作校正曲线。
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