1、流动相的要求:
高效液相级色谱醇,二次蒸馏水,缓冲盐一定要过滤;流动相脱气至关重要(可采用抽滤,超声波脱气等方法)
2、吸滤头:
特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞;亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗;清洗不成功则需要更换。
3、单向阀:
如遇到泵压不稳或流动相不能抽取,则可能是单向阀出现问题,卸下用异丙醇超声波清洗,清洗时须按其安装的方向放置在小烧杯中,切记不可与安装方向倒置超洗!
4、泵头:
泵头漏液或出现其它故障一般要申请维修(如漏液,或更换柱塞杆及其密封垫等)
5、过滤器:
当色谱峰出现异常情况时,有可能是此部件被污染,拆下用异丙醇超洗或更换过滤垫片。
6、排液阀:
此处不能完全密封或漏液时一般是其中的垫片污染或磨损,可卸下后取出其垫片用异丙醇超声波清洗或更换垫圈。
7、手动进样器:
平时应注意用二次蒸馏水和甲醇在装载状态及进样分析状态清洗;如出现漏液现象,原因极可能为转子密封垫磨损或污染,一般须申请维修或更换配件。
8、流通池:
在色谱峰不正常时会可能是此部件补污染。可拆卸后取出其中的垫片用异丙醇超洗(可根据说明书进行操作或申请维修)。
9、工作站:
出现死机可重起计算机;不正常运行时,首先可更换电脑测试其硬件故障;或在本机上重新插拔接口、重新安装软件。
高效液固色谱仪是利用样品各组分在固定相和流动相中吸附-解吸作用的差异,使各组分在作相对运动的两相中反复多次受到吸附-解吸作用而达到相互分离。
主要类型:
液固吸附色谱
1.1分离原理液固色谱是基于各组分吸附能力的差异进行混合物分离的,其固定相是固体吸附剂。
1.2固定相;吸附色谱固定相可以分为极性和非极性两大类。
1.3流动相;流动相要求:
1.3.1选用的溶剂应当与固定相互不相溶,并能保持色谱柱的稳定性
1.3.2选用的溶剂应有高纯度,以防所含微量杂质在柱中积累,引起柱性能的改变。
1.3.3选用的溶剂性能应与所使用的检测器相匹配,如果使用紫外吸收检测器,就不能选用在检测波长下有紫外吸收的溶剂;若使用示差折光检测器,就不能用梯度洗脱。
1.3.4选用的溶剂应对样品有足够的溶解能力,以提高测定的灵敏度。
1.3.5选用的溶剂应具有低的黏度和适当低的沸点。
1.3.6应尽量避免使用具有显著毒性的溶剂,以保证工作人员的安全
1.4应用:液固色谱是以表面吸附性能力为依据的,所以它常用于分离极性不同低的化合物,也能分离那些具有相同极性基团,但数量不同的样品。
液液分配色谱
1.1分离原理;分配色谱法的原理与液液萃取相同,都是分配定律。
1.2固定相;分配色谱固定相由两部分组成,一部分是惰性载体,另一部分是涂渍在惰性载体上的固定液。
1.3流动相;分内色谱中,要求流动相尽可能不与固定液互溶
1.4应用;既能分离极性化合物,又能分离非极性化合物。由于不同极性键合固定相的出现,分离的选择性可得到很好的控制。
键合相色谱
1.1分离原理
1.1.1正键合相色谱分离远离:使用的是极性键和固定性,溶质在此类固定相上的分离机理属于分配色谱。
1.1.2反键合相色谱分离原理:使用的是极性较小的键合固定相,其分离机理可用疏溶剂作用理论来解释。
1.2固定相;按极性大小可分为非极性、弱极性、极性化学键合固定相三种。
1.3流动相
1.3.1正键合相色谱中,采用和反相液液分配色谱相似的流动相,流动相的主体成分为己烷或庚烷。
1.3.2反相键合相色谱中,流动相采用和反相液液分配色谱相似的流动相,主题为水。
1.4应用
1.4.1正键合相色谱法的应用:多用于分离各类极性化合物如染料、炸药、多巴胺、氨基酸等;
1.4.2反键合相色谱法的应用:由于操作简单,稳定性和重复性好,该方法已成为一种通用型液相色谱分析方法。在生物化学、医药研究、食品分析和环境污染分析等多个领域有了很大的应用和发展。
凝胶色谱
凝胶色谱又称分子排阻色谱,它是按照分子尺寸大小顺序进行分离的一种色谱方法。凝胶色谱法的固定相凝胶是一种多孔性的聚合材料,有一定的形状和稳定性。根据所用流动相的不同,凝胶色谱法可以分为两类:即用水溶剂做流动相的凝胶过滤色谱法(GFC)与用有机溶剂如四氢呋喃做流动相的凝胶渗透色谱法(GPC)。
高效液相色谱仪可以完成二元高压梯度洗脱,也可以拓展为制备系统,采用高压混合器连接两个高压恒流泵,利用RS232通讯,即可实现梯度分析;
便于用户自由选择与搭配,混合器材主要由不锈钢、生物惰性PEEK等构成,用途广泛;
可广泛应用于研究开发、医药检验、食品检测、化工分析、环境监测等众多分析领域。
高效液相色谱仪分离原理:液-液分配(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化学键合相色谱(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流动相和固定相都是液体。
流动相与固定相之间应互不相溶(极性不同,避免固定液流失),有一个明显的分界面。
当试样进入色谱柱,溶质在两相间进行分配。达到平衡时,高效液相色谱仪报价,服从于高效液相色谱计算公式;
6种定量计算方法:归一法、修正归一法、带比例因子的修正归一法、内标法、外标法,高效液相色谱仪适用范围,以及指数计算法。
高效液相色谱仪特点:
1、梯度洗脱内部软件可自控制,编辑、存贮60个梯度方法,运行复杂的梯度程序;
2、泵形式:串联双柱塞 浮动式密封圈;泵头自冲洗功能,泵无须手动排空即可输液“自吸式单向阀”技术,可延长密封圈使用寿命;
3、光路系统采用精密定位结构和独特的散热技术,高效的光学系统和数字过滤;
4、程序化的溶剂类和压缩因子,可自动补偿;完整的预清洗功能,更于快速溶剂更换;
5、波长调节功能:既可由键盘面板控制也可由程序软件设定,全封闭集成型光电检测元件,无需任何机械部分调整即可选择或改变波长;
6、光源运行时间在线监测并显示,方便用户确定光源寿命;
7、三条流量校正曲线以及特有的多点参数校正,保障了极高的流量准确性;
8、梯度:高压2-3元;梯度方式:高压,梯度洗脱内部软件可自控制,可通过PC机及泵控制;
9、实时显示样品池和参比池能量,方便判断光源和流通池状态;
10、紫外检测器具有自动波长定位调整,自动调零,多量程输出选择;
11、智能化高,可实现网络化平台监控,提高了你的QC效益;
12、自动化,让你从繁锁的分析操作中解放出更多的时间。
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