分光光度计中zui简单的和应用zui普遍的一种。它的特点是只有一条光束。通过交换参比和样品的位置,使其分别进入光路。
在参比(溶剂)进入光路时,调零。然后将样品进入光路的信号和参比信号进行比较,就可在显示器上读出样品的透过率和吸光度。
分光光度计的保养方法
1.若大幅度改变测试波长,需稍等片刻,等灯热平衡后,重新校正“0”和“100%”点。然后再测量。
2.指针式仪器在未接通电源时,电表的指针必须位于零刻度上。若不是这种情况,需进行机械调零。
3.比色皿使用完毕后,请立即用蒸馏水冲洗干净,并用干净柔软的纱布将水迹擦去,以防止表面光洁度被破坏,影响比色皿的透光率。
4.操作人员不应轻易动灯泡及反光镜灯,以免影响光效率。
5.1900型等分光光度计,由于其光电接收装置为光电倍增管,它本身的特点是放大倍数大,因而可以用于检测微弱光电信号,而不能用来检测强光。
否则容易产生信号漂移,灵敏度下降。针对其上述特点,在维修、使用此类仪器时应注意不让光电倍增管长时间暴露于光下;
因此在预热时,应打开比色皿盖或使用挡光杆,避免长时间照射使其性能漂移而导致工作不稳。
6.放大器灵敏度换挡后,必须重新调零。
7.比色杯的配套性问题。比色杯必须配套使用,否则将使测试结果失去意义。在进行每次测试前均应进行比较。
具体方法如下;分别向被测的两只杯子里注入同样的溶液,把仪器置于某一波长处,石英比色杯;220nm、700nm装蒸馏水,玻璃比色杯:
700nm处装蒸馏水,将某一个池的透射比值调至100%,测量其他各池的透射比值,记录其示值之差及通光方向;
如透射比之差在±0.5%的范围内则可以配套使用,若超出此范围应考虑其对测试结果的影响。
分光光度计由于在每个波长都需要变换参比和样品的位置,所以只能手动,不能扫描吸收光谱。
它的结构比较简单,使用也有一定限制,但如配置程序控制和打印装置,则对一些常规的定量测定还是比较适用的。
紫外及可见光分光光度计的可测波长范围为200一1000 nm,也有波长范围为200- 400 nm的紫外分光光度计,但前者较为普遍。紫外及可见光分光光度计的构造原理与可见光分光光度计(如721型分光光度计)相似。由于玻璃吸收紫外光,因此单色器要用石英棱镜或光栅。
(一)光(light source)
有钨丝灯及氢灯(或氛灯)两种。可见光区(360一1000 nm)使用钨丝灯;紫外光区 (200一360 nm)则用氢灯或氛灯。
(二)吸收池(absorption cell)
由于玻璃吸收紫外光.吸收池要用石英材质。
(三)检浏器(detector)
检侧器使用两只光电管,一为氧化艳光电管,用于625一1000 nm波长范围;另一只是锑艳光电管,用于200一625 nm波长范围。光电倍增管亦为常用的检测器,其灵敏度比一般的光电管高2个数量级。
紫外及可见光分光光度计分单光束和双光束型。单光束型仪器使用前一般需要预热以使仪器稳定,缺点是难以消除与补偿由于光源与电子测量系统不稳定等所引致的误差。双光束型仪器能够消除与补偿由于光源、电子测量系统不稳定等所引致的误差,所以其测盘的精确度就提高了。
其工作原理可描述为:由光源(钨丝灯氘灯,根据波长而变换使用)发出的光经人口狭缝及反射镜反射至石英棱镜或光栅,色散后经过出口狭缝而得到所需波长的单色光束。然后由反射镜反射至由马达转动的调制板及扇形镜上。当调制板以一定转速旋转时,时而使光束通过,时而挡住光束,因而调制成一定频率的交变光束。之后扇形镜在旋转时,将此交变光束交替地投射到参比溶液(空白溶液)及试样溶液上,后面的光电倍增管接受通过参比溶液及为试样溶液所减弱的交变光通量,并使之转变为测量信号。此信号经放大并用解调器分离及整流,然后以电位器自动平衡此两直流信号的比率,并依照记录器记录得到吸收曲线。
1、紫外可见分光光度计噪音较大
原因:
光源灯泡使用时间超过寿命期
处理方法:
更换光源灯泡
2、在使用过程中,出现数字显示不能归零,同时伴有图线记录基线位置偏高
原因:
①光电倍增等老化,性能降低
②信号处理板可能发生故障
③前置放大版出现故障,引起反馈量增大
处理方法:
①开机通电,先做记录故障曲线,再与原始记录的标准曲线对照,找出异同点,并作一下定性定能分析。然后用一只同型号规格的新光电倍增管替换机上的光电管,再开机实验,结果记录出来的图线并没有什么变化,由此证明光电倍增管没有老化变质。
②进一步检查信号处理板,未发现信号处理板各元器件损坏,对影响灵敏度有关的电位器检测,结果测得数据正常,这说明信号处理板没有故障。
3、紫外可见分光光度计自检时提示波长自检出错
原因:
自检过程中可能打开过仪器样品室的盖子
处理方法:
关上仪器样品室盖子,重新自检
4、仪器自检时提示通讯错误
原因:
仪器与电脑之间的数据线没有连接好
处理方法:
连接好数据线,重新打开仪器和软件,重新自检
5、测试过程中提示能量太低
原因:
①光源灯泡使用时间超过寿命期
②样池中有不透光的东西挡住了光
处理方法:
紫外可见分光光度计更换光源灯泡;拿走挡光的物品