1、流动相的要求:
高效液相级色谱醇,二次蒸馏水,缓冲盐一定要过滤;流动相脱气至关重要(可采用抽滤,超声波脱气等方法)
2、吸滤头:
特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞;亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗;清洗不成功则需要更换。
3、单向阀:
如遇到泵压不稳或流动相不能抽取,则可能是单向阀出现问题,卸下用异丙醇超声波清洗,清洗时须按其安装的方向放置在小烧杯中,切记不可与安装方向倒置超洗!
4、泵头:
泵头漏液或出现其它故障一般要申请维修(如漏液,或更换柱塞杆及其密封垫等)
5、过滤器:
当色谱峰出现异常情况时,有可能是此部件被污染,拆下用异丙醇超洗或更换过滤垫片。
6、排液阀:
此处不能完全密封或漏液时一般是其中的垫片污染或磨损,可卸下后取出其垫片用异丙醇超声波清洗或更换垫圈。
7、手动进样器:
平时应注意用二次蒸馏水和甲醇在装载状态及进样分析状态清洗;如出现漏液现象,原因极可能为转子密封垫磨损或污染,一般须申请维修或更换配件。
8、流通池:
在色谱峰不正常时会可能是此部件补污染。可拆卸后取出其中的垫片用异丙醇超洗(可根据说明书进行操作或申请维修)。
9、工作站:
出现死机可重起计算机;不正常运行时,首先可更换电脑测试其硬件故障;或在本机上重新插拔接口、重新安装软件。
在范第姆特方程模型基础上,根据液相色谱的特点作了某些修正,得到如下几种液相色谱速率理论方程式。
1、高效液相色谱速率理论方程式:
其中涡流扩散项:
分子扩散项:
传质阻力项:
其中包括:称为流动的流动相中传质阻力系数,称为滞留的流动相中的传质阻力系数,称为固定相中的传质阻力系数。
高效液相色谱速率理论方程详细表达式:
式中,
dp——色谱柱填料平均粒径;
df——固定相有效液膜厚度;
U——流动相平均流速;
Dm——组分分子在流动相中的扩散系数;
Ds——组分分子在固定相中的扩散系数;
wm——由色谱柱和填充的性质所决定的系数;
ws——与容量因子k有关的系数;
wsm——与颗粒微孔中被流动相所占据部分的分数以及容量因子k有关的系数。其余符号含义同前面。
从上式中可以看出,液相色谱和气象色谱的速率方程式基本一致,主要区别在于液相色谱中影响柱效的主要因素是传质阻力项,而份子扩散项对柱效的影响不像气相色谱那样明显。
2.吉丁斯修正速率理论方程式:
吉丁斯认为流动相流速对涡流扩散项影响较大,对范第姆特方程修正如下:
式中为涡流扩散项,相当于上式的含义。
高效液相色谱仪色谱柱性能的评价包括评价内容和评价方法等方面。
一、评价内容:
1、分离效能。
2、对指定溶质的选择性。
3、在不同PH值介质中的稳定性。
4、不同批次但同型号填料间性能的重现性。
5、适宜的操作压力等。
二、评价方法:
以指定的一组标准溶质为样品,测定其在色谱柱上的理论塔板数,作为柱效的衡量指标。
例:对于反相色谱填料,可以选择一组具有不同极性的芳香族化合物,如苯、萘、菲、苯、甲苯和二甲苯等作为基本组分,再加以苯酚和苯胺等酸、碱性溶质。