高效液相色谱仪色谱柱在色谱分析系统中主要起着分离检测物质的作用，如同色谱系统的心脏，同时也是易损耗品。什么情况下会导致液相色谱柱柱效降低甚至“失效”。
1、筛板堵塞
色谱柱入口筛板堵塞是常见的问题之一，会导致柱压升高、色谱峰拖尾、塔板数降低等问题。通常分析样品中微粒杂质最右可能堵塞色谱柱入口，因此分析时，需要先过滤或者离心，乳浊或浑浊样品应以0.25?m滤膜处理，也可用针头过滤器过滤。进样器与泵密封垫的磨损也会带入微粒，在进样阀与色谱柱之间使用0.25?m或0.45?m的在线过滤器，通常可以避免这类问题
2、强保留样品组分
强吸附性的样品组分吸附在柱头填料上，能严重地影响色谱柱寿命。像生物组织或体液的提取物、天然产物等复杂样品，极易造成柱头的污染。相对较纯的样品，一般不会出现这一问题。色谱柱应用中，色谱峰严重拖尾或分裂往往是强保留污染物在柱头吸附的体现。
3、色谱柱装填不良
装填不良的色谱柱，在短时间应用后，填充床的压缩通常使柱头处产生塌陷，导致柱效突然降低。色谱柱的初始评价指标，如塔板数、不对称因子等往往不能很好地表征色谱柱床层的稳定性，这种情绪只能在实际应用中发现。
4、压力因素
液相色谱仪色谱柱使用过程中的骤然压力波动、机械撞击或温度骤然变化都会对色谱柱床层产生影响，导致峰形变差和柱效降低。进样过程中，进样阀转动太慢可引起压力波动，使色谱柱床产生裂隙，在柱切换时也存在同样的问题。使用填充良好的色谱柱，在较低柱压下操作，可大大减少由压力波动造成的色谱柱损坏。
有些色谱柱厂家建议在使用液相色谱柱时加入保护柱，保护柱是收集、阻断来自进样器的机械和化学杂质，以保护和延长分析柱的使用寿命。
柱子的再生
色谱柱属于色谱分析的常用消耗品，它是有寿命的；但它寿命的长短与我们的样品处理程度、有无加保护柱以及清洗是否恰当和彻底紧密相关！当柱子在使用一段时间以后，它的柱压可能升高，柱效可能降低，这时如果我们对柱子进行再生，它的寿命也许会得到一定的延长。
柱子使用
1、首先要确认您所要分析的样品流动相的pH范围是否在您的柱子的pH范围之内，以免损坏柱子硅胶！
2、接下来就是用你做样品的流动相去平衡柱子，如果您的流动相中含有缓冲盐溶液，在平衡柱子之前务必要先用5％的甲醇(乙腈)/水去过渡10倍柱体积(150x4.6mm柱子约为30ml，250x4.6mm柱子约为45ml；下同)以上，再用带盐的流动相去平衡柱子足够的时间(直到基线非常平稳为止)，之后方可进样分析。
3、无论您分析何种样品，都会由于各种原因样品中总有部分杂质，因此建议您在进样前在柱子前端加接保护柱以保护您那昂贵的分析柱，或者用0.2um或 0.45um针头过滤器过滤样品后方进样分析！
高效液固色谱仪是利用样品各组分在固定相和流动相中吸附－解吸作用的差异，使各组分在作相对运动的两相中反复多次受到吸附－解吸作用而达到相互分离。 主要类型： 液固吸附色谱 1.1分离原理液固色谱是基于各组分吸附能力的差异进行混合物分离的，其固定相是固体吸附剂。 1.2固定相；吸附色谱固定相可以分为极性和非极性两大类。 1.3流动相；流动相要求： 1.3.1选用的溶剂应当与固定相互不相溶，并能保持色谱柱的稳定性 1.3.2选用的溶剂应有高纯度，以防所含微量杂质在柱中积累，引起柱性能的改变。 1.3.3选用的溶剂性能应与所使用的检测器相匹配，如果使用紫外吸收检测器，就不能选用在检测波长下有紫外吸收的溶剂；若使用示差折光检测器，就不能用梯度洗脱。 1.3.4选用的溶剂应对样品有足够的溶解能力，以提高测定的灵敏度。 1.3.5选用的溶剂应具有低的黏度和适当低的沸点。 1.3.6应尽量避免使用具有显著毒性的溶剂，以保证工作人员的安全 1.4应用：液固色谱是以表面吸附性能力为依据的，所以它常用于分离极性不同低的化合物，也能分离那些具有相同极性基团，但数量不同的样品。 液液分配色谱 1.1分离原理；分配色谱法的原理与液液萃取相同，都是分配定律。 1.2固定相；分配色谱固定相由两部分组成，一部分是惰性载体，另一部分是涂渍在惰性载体上的固定液。 1.3流动相；分内色谱中，要求流动相尽可能不与固定液互溶 1.4应用；既能分离极性化合物，又能分离非极性化合物。由于不同极性键合固定相的出现，分离的选择性可得到很好的控制。 键合相色谱 1.1分离原理 1.1.1正键合相色谱分离远离：使用的是极性键和固定性，溶质在此类固定相上的分离机理属于分配色谱。 1.1.2反键合相色谱分离原理：使用的是极性较小的键合固定相，其分离机理可用疏溶剂作用理论来解释。 1.2固定相；按极性大小可分为非极性、弱极性、极性化学键合固定相三种。 1.3流动相 1.3.1正键合相色谱中，采用和反相液液分配色谱相似的流动相，流动相的主体成分为己烷或庚烷。 1.3.2反相键合相色谱中，流动相采用和反相液液分配色谱相似的流动相，主题为水。 1.4应用 1.4.1正键合相色谱法的应用：多用于分离各类极性化合物如染料、炸药、多巴胺、氨基酸等； 1.4.2反键合相色谱法的应用：由于操作简单，稳定性和重复性好，该方法已成为一种通用型液相色谱分析方法。在生物化学、医药研究、食品分析和环境污染分析等多个领域有了很大的应用和发展。 凝胶色谱 凝胶色谱又称分子排阻色谱，它是按照分子尺寸大小顺序进行分离的一种色谱方法。凝胶色谱法的固定相凝胶是一种多孔性的聚合材料，有一定的形状和稳定性。根据所用流动相的不同，凝胶色谱法可以分为两类：即用水溶剂做流动相的凝胶过滤色谱法（GFC）与用有机溶剂如四氢呋喃做流动相的凝胶渗透色谱法（GPC）。
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