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安捷伦液相色谱仪的规范操作 液相色谱操作规程

时间:2020-05-16    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     
  安捷伦液相色谱仪的规范操作
 
  1. 目的:明确安捷伦液相色谱仪的规范操作,确保数据的准确性。
 
  2. 范围:适用于安捷伦液相色谱仪。
 
  3. 职责:检验人员对此负责。
 
  4. 操作规程:
 
  4.1 系统组成
 
  本系统由1个溶剂二元输送泵(分主/A泵和副/B泵)、手动进样阀、柱温箱、检测器、化学工作站和电脑等组成。
 
  4.2 准备
 
  4.2.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相,用合适的0.45μm滤膜过滤,超声脱气20min。
 
  4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱(柱进出口位置应与流动相流向一致)和定量环。
 
  4.2.3 配制样品和标准溶液(也可在平衡系统时配制),用合适的0.45μm滤膜过滤。
 
  4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常
 
  4.1 将待测样品按要求前处理,准备HPLC 所需流动相,检查线路是否连接完好,废液瓶是否够用等。
 
  4.3开机:
 
  4.3.1 打开计算机,进入中文Windows XP画面,并运行CAG Bootp Server程序。
 
  4.3.2 打开 1200 LC 各模块电源。
 
  4.3.3 待各模块自检完成后,双击[Instrument 1 Online]图标,化学工作站自动与1200LC
 
  通讯,进入的工作站画面如下所示。
 
  4.3.4 从[视图]菜单中选择[方法和运行控制]画面, 点击[视图]菜单中的[显示顶部 工具栏], [ 显示状态工具栏],[系统视图],[样品视图],使其命令前有[√]标志,来调用所需的界面。
 
  4.3.5 把流动相放入溶剂瓶中。
 
  4.3.6 打开冲洗阀。
 
  4.3.7 点击[泵]图标,点击[设置泵…]选项,进入泵编辑画面。
 
  4.3.8 设流速:5ml/min,点击[确定]。
 
  4.3.9 点击[泵] 图标,点击[控制…]选项,选中[启动],点击[确定] ,则系统开始冲洗,直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止,切换通道继续冲洗,直到所有要用通道无气泡为止。
 
  4.3.10 点击[泵] 图标,点击[控制…]选项,选中[关闭],点击[确定]关泵, 关闭冲洗阀。
 
  4.3.11 点击[泵]图标,点击 [设置泵…选项],设流速:1.0ml/min。
 
  4.3.12 点击泵下面的瓶图标,如下图所示(以单元泵为例),输入溶剂的实际体积和瓶体积。 也可输入停泵的体积,点击[确定]。
 
  4.4 数据采集方法编辑
 
  4.4.1开始编辑完整方法:从[方法]菜单中选择[编辑完整方法…] 项,如下图所示选中除[数据分析 ]外的三项,点击[确定],进入下一画面。 4.4.2方法信息
 
  4.4.2.1在[方法注释]中加入方法的信息(如:测试方法)。 4.4.2.2 点击 [确定], 进入下一画面。 4.4.3 泵参数设定
 
  4.4.3.1 在[流速]处输入流量,如1ml/min,在[溶剂 B]处输入80.0,(A=100-B) ,也可[插入 ]一行[时间表] ,编辑梯度。在[压力限]处输入柱子的zui大耐高压,以保护柱子。
 
  4.4.3.2 点击[确定],进入下一画面。
 
  4.4.4 柱温箱参数设定
 
  4.4.4.1 在[温度]下面的空白方框内输入所需温度,如:40度。并选中它,点击[更多>>] 键,如图所示,选中[与左侧相同],使柱温箱的温度左右一致。
 
  4.4.4.2 点击[确定],进入下一画面。
 
  4.4.5 检测器参数设定:检测波长:一般选择zui大吸收处的波长。样品带宽:一般选择zui大吸收值一半处的整个宽度。参比波长:一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域 。参比带宽:至少要与样品信号的带宽相等,许多情况下用100nm作为缺省值。同时可以输入采集光谱方式,步长,范围,阈值。选中所用的灯。
 
  4.4.6 在[ 运行时选项表 ]中选中[ 数据采集],点击[确定]。
 
  4.4.7 点击[方法]菜单,选中[方法另存为…],输入一方法名,如[测试],点击[确定]。
 
  4.4.8 从菜单 [视图]中选中[在线信号],选中[信号窗口1],然后点击[改变…] 钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击[确定]。(如同时检测二个信号,则重复10,选中[信号窗口2]。
 
  单击[改变]键,即可弹出右侧的[编辑信号图谱]窗口,进而选择所需的谱图信号。 4.4.9 从[运行控制]菜单中选择[样品信息]选项,如下图所示,输入操作者名称,如[安装工程师];在[数据文件 ]中选择[手动]或[前缀/计数器]。区别: 手动--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。 Pr—在前缀/计数器----[前缀]框中输入前缀,在[计数器]框中输入计数器的起始位,仪器会自动命名,如vwd数据0001,vwd数据0002……。
 
  4.4.10 点击[确定] ,从[仪器] 菜单选择[系统开启]。
 
  4.4.11 等仪器准备好,基线平稳,用试样溶液清洗注射器,并排除气泡后抽取适量。

高效液相色谱仪的脱气的必要性

  在食品分析中,无论是残留分析还是成分分析,HPLC 也已成为不可或缺的。流动相脱气是HPLC 系统能得到可靠数据的一个很有效的措施。下面分析一下,高效液相色谱脱气的必要性,并总结归纳了脱气常用的方法。

  一、脱气的必要性

  流动相脱气是HPLC 系统能得到可靠数据的一个很有效的措施。HPLC 泵在输送液体时要产生很大的力量,由于气体的压缩比与液体相比大的多,因而当气泡存在时,我们发现瞬间的流速降低和系统压力下降。如果这个气泡足够大,液相泵将不能输送任何溶剂,而且如果压力低于预先设定的压力低限,泵将停止工作。当一个气泡通过输液泵时,由于系统压力大,气泡通常会溶解在流动相溶液中,随流动相通过柱子。但是到达检测器流通池时系统压力又恢复到了大气压,因而气泡可能在检测器流通池中又显现,在色谱图上会出现不规律的毛刺。

  二、脱气方法

  1、吹氦脱气法。

  利用氦气在液体中溶解度比空气低的特性,在0.1MPa 压力下,以约60 mL/min 流速通入流动相储液容器中10~15min,可以很有效地从流动相中排除溶解的空气,能排除接近80%的氧气。采用一个高效分布式喷射流装置,一体积的氦气可从流动相中将等体积的几乎全部气体排除。这意味着1L 氦气通过1L 流动相就可完成排气这个工作。这种脱气方法虽然好,但氦气价格较高,很少使用。

  2、加热回流法。

  此法的脱气效果较好。在操作时要注意冷凝塔的冷却效率,否则溶剂会丢失,混合流动相的比例会有变化。

  3、抽真空脱气法。

  此法可使用真空泵,降压至0.05~0.07MPa ,即可除去溶解的气体。但是由于真空脱气会使混合溶剂组成发生变化,从而影响到实验的重现性,因此多用于单溶剂体系的简单分析。

  4、超声波脱气法。

  将欲脱气的流动相置于超声波清洗机中,用超声波震荡10~20min。此法的脱气效果最差。

标签: 高效液相色谱仪
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液相色谱柱常用的填料都有哪些

  在液相色谱分离系统中,色谱填料选择的正确与否会直接影响到专业的液相色谱柱分离物质效果的好坏。由于液相色谱填料具有相当宽的选择范围,所以我们在购买液相色谱柱之前有必要对不同液相色谱填料进行一个简单的认识和了解。

  第一、正相色谱硅胶基质填料。

  正相色谱柱的固定相是由硅胶和其他具有极性官能团组成的键合相填料。其物质分离特点是极性较弱组合最先被色谱柱冲洗出来。而且正相色谱所使用的流动相其极性要低于固定相,流动相通常使用正乙烷和二氯甲烷等。

  第二、反相色谱硅胶基质填料。

  反向色谱柱的填料是以硅胶材料为主要物质,并与极性相对较弱的官能团组成的键合相。其物质分离特点是极性较强组合最先被色谱柱冲洗出来,而极性弱的组分则会更强的保留在柱子上。反向色谱的流动相的极性相对较强,常配制有机缓冲液作为流动相。目前较为常用的反相色谱填料有C4(B)、C8(MOS)以及C18(ODS)等。

  第三、聚合物填料。

  这种聚合物的填料一般是由聚甲基丙酸酯或者聚苯乙烯-二乙烯基苯组成。其特点是这种色谱柱的酸碱度适用范围相对较广,且疏水性很强,但它的柱效相对于硅胶基质的填料要低一些。一般将这种大孔的基质填料用于蛋白质的分离。

  第四、其他无机填料。

  如石墨化碳对于酸碱度和温度没用严格的限制范围,一般可对一些几何导构体进行分离。此外还有氧化铝以及氧化锆等无机填料的应用。

  总而言之,如果我们能够全面系统的了解一下液相色谱柱填料的分类及特点,那么我们在选择购买一流的色谱柱时就可以在一个相对较小的范围内顺利找到自己所需要的产品。这样我们就可以在节省选择购买时间的同时,也能快速买到令自己满意的色谱柱。

标签: 液相色谱柱
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