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暗视场显微镜的原理及注意事项 显微镜操作规程

时间:2020-05-16    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     
   【仪器网 使用手册】暗视场显微镜:使用特殊的暗视场聚光镜使照明光线偏移而不进入物镜,只有样品的散射光进入物镜。
  
  注意事项
  
  1、制作暗视场光挡时,若光挡直径过小或光挡的中心位置不正,则不能全部挡掉直射光,视野不暗,样品与背景的明暗反差不明显;若光挡直径过大,聚焦到样品上的光线不足,使暗视野显微镜观察到的样品亮度不佳,影响观察效果。
  
  2、使用暗视野显微镜时,照明光源的照明强度要高,否则样品的反射光强度不够,影响观察效果。
  
  3、若视场中样品与背景明暗反差不强时,可以上下调节聚光器的位置,使视场内的反差提高。
  
  4、要求使用的载玻片和盖玻片必须无划痕且无灰尘,物镜前透镜也必须清洁无尘。载玻片与盖玻片的厚度应符合标准。载玻片太厚,聚光器的焦点将落在载玻片内,达不到被检物体的平面上;使用油镜头时,由于物镜的工作距离很短,甚至无法调焦,从而看不到或看不清被检物体。
  
  5、载玻片的厚度要适宜,照明光束经暗视野显微镜聚光器后,产生空心照明光锥,即中心为暗区。而反射光的焦点在聚光器上透镜表面之上,很短的距离。因此,载玻片的适宜厚度为0.8~1.2mm。
  
  6、物镜的数值孔径必须小于聚光器的数值孔径,否则会因物镜的孔径角大于暗视野显微镜聚光器所形成的照明光束中心暗区的角度,致使部分照明光线射入物镜,破坏或降低了暗视场的照明。
  
  7、暗视野显微镜镜检时室内要暗,如果没有这样的条件,应尽可能使用遮光装置,以阻止目镜周围的光线射入。
  
  8、在进行油镜镜检时,由于油内的杂质和气泡的漫反射,会妨碍暗视野显微镜镜检效果,所以要求尽可能地除掉油内的杂质和气泡。
  
  工作原理
  
  暗视场显微镜在构造上应用丁达尔现象(Tyndall phenomenon:当聚光光束射入溶胶时,从光束的侧面可以看到一条发亮的光柱,在光的传播过程中,光线照射到粒子时,如粒子直径略小于入射光波长,则发生光的散射,每个微粒就成为一个发光点,从侧面可以看到一条光柱。),装配了一类特殊聚光器——暗视场聚光器,使入射光束,从聚光器斜向照明被检样品。由于照明光线与显微镜光轴形成较大的角度通过物场,或因聚光器的特殊构造,照明光线在聚光器顶透镜或盖片的上表面发生全反射,致使照明光线不能入射物镜之内。但是,样品被照明并发出反射光。镜检时,因不能直接观察到照明光线,与光轴垂直的平面视场暗黑,在深暗的背景上能清晰地看到由散射光和反射光形成的明亮的物体影像,物像与背景造成很大的反差。视场内的样品,被斜射光线照明,可从样品各种结构表面散射和反射光线,看到许多细胞器的明亮轮廓,诸如细胞核、线粒体、液泡以及某些内含物等。如果是正在分裂的细胞,其各类纺锤丝和染色体亦可窥见。
  
  暗视场显微镜是利用样品的散射光和反射光进行观察,所以只能看到物体的存在与运动而不能辨清其微细结构。暗视场显微镜的检测能力,取决于入射光的强度和视场的反差,后者又随微粒及其背景的折射率差别的加大而增加。
  
  暗视场显微镜与普通光学显微镜的区别,主要在于聚光器的不同,致使照明方法有别。确切地说,称暗视场显微镜为暗视场照明更为贴切。暗视场照明是斜向照明的一种,这种照明法能提高对微小物体的分辨能力,对大小在0.004μm以上的微小粒子,尽管看不清楚其结构,亦可清晰地分辨其存在和运动。

关于电子显微镜的放大倍率说明

    人类认识自然界大部分信息来自眼睛,在对周围世界的认识中,总是希望看到细微的细节。众多微观世界的结构需要能够分辨,并达到人裸眼分辨的状态,才能够正常观察。由于正常人眼在25cm明视状态下,能够分辨的距离是0.2mm,因此可以使用放大镜将物体放大来观察物体的细节。例如,用10倍的放大镜可以将两个质点间的距离放大10倍,肉眼即可以分辨出0.02mm之间的两点,使物体看得更清晰。但放大镜的倍数有限,不能达到更高的分辨率。因此,分辨本领和放大倍率成为电子显微镜要的两大基本问题。此文重点已放大倍率为主题,展开详细介绍:    放大倍率也是显微镜性能的一种指标。电子显微镜不仅需要有较佳的分辨本领,还需要有合理的放大倍率。只有通过合理地放大,人眼才能依靠电子显微镜的较佳分辨本领区分精细的物体和结构。    放大镜是凸透镜,其形状为中间厚,边缘薄。光线在均匀的各向同性介质中,两点之间以直线传播,当通过不同密度介质的透明物体时,则发生折射现象,使光线向中间汇聚。折射、聚焦是放大镜的基本原理。当用放大镜观察物体时,眼睛在放大镜上面,物体放在放大镜下面。物体的光线穿过时,发生折射,使光线向中间汇聚,进入人眼。物体在人眼视网膜上所成像的大小与物体对眼所张的角成正比。视角愈大,像也愈大,愈能分辨物体的细节。

    放大镜工作原理

    光学显微镜的物镜,目镜及聚光镜等部件均由单个和多个透镜组成。仪器总放大倍率是仪器各透镜放大率的乘积,以光镜为例:

    放大倍率

    式中,ML为总放大倍率,MO为物镜放大倍率,Me为目镜放大率。用油浸物镜时,光镜总放大倍率为:

    放大倍率

    如果增大Mo或透镜数目,总放大倍率ML尚可增大,结果像虽然增大,但却是模糊不清的。这种无意义的放大,称空放大,确切地说就是超过有效放大率的放大称为空放大。    有效放大率由式得出:

    有效放大率

    分辨本领为2埃的电镜有效放大率:

    有效放大率

    即100万倍,比光镜大1000倍。        根据以上式中可以得出,有效放大率由分辨本领所决定,而分辨本领又是仪器仪表基础的性能指标,若低于有效放大率则仪器没有完全发挥其性能。若高于放大倍率就成无意义的放大了。

标签: 电子显微镜
电子显微镜 关于电子显微镜的放大倍率说明_电子显微镜

光学显微镜的使用要点

  一、正确安装

  使用前,首先要把显微镜的目镜和物镜安装上去。目镜的安装极为简单,主要的问题在于物镜的安装,由于物镜镜头较贵重,万一学生安装时螺纹没合好,易摔到地上,造成镜头损坏,所以为了保险起见,强调学生安装物镜时用左手食指合中指托住物镜,然后用右手将物镜装上去,这样即使没安装好,也不会摔到地上。

  二、正确对光

  对光是使用显微镜时很重要的一步,有些学生在对光时,随便转一个物镜对着通光孔,而不是按要求一定用低倍镜对光。转动反光镜时喜欢用一只手,往往将反光镜扳了下来。所以教师在指导学生时,一定要强调用低倍镜对光,当光线较强时用小光圈,平面镜,而光线较弱时则用大光圈,凹面镜,反光镜要用双手转动,当看到均匀光亮的圆形视野为止。光对好后不要随便的移动显微镜,以免光线不能准确的通过反光镜进入通光孔。

  三、正确使用准焦螺旋

  使用准焦螺旋调节焦距,找到物象可以说是显微镜使用中重要的一步,也是学生感觉较为困难的一步。学生在操作中极易出现以下错误:一是在高倍镜下直接调焦;二是不管镜筒上升或下降,眼睛始终在目镜中看视野;三是不了解物距的临界值,物距调到2~3厘米时还在往上调,而且转动准焦螺旋的速度很快。前两种错误结果往往造成物镜镜头抵触到装片,损伤装片或镜头,而第三种错误则是学生使用显微镜时常见的一种现象。针对以上错误,教师一定要向学生强调,调节焦距一定要在低倍镜下调,先转动粗准焦螺旋,使镜筒慢慢下降,物镜靠近载玻片,但注意不要让物镜碰到载玻片,在这个过程中眼睛要从侧面看物镜,然后用左眼朝目镜内注视,并慢慢反向调节粗准焦螺旋,使镜筒缓缓上升,直到看到物像为止,同时向学生说明一般显微镜的物距在1厘米左右,所以如果物距已远远超过1厘米,但仍未看到物象,那可能是标本未在视野内或转动粗准焦螺旋过快,此时应调整装片位置,然后再重复上述步骤,当视野中出现模糊的物象时,就要换用细准焦螺旋调节,只有这样,才能缩小寻找范围,提高找到物象的速度。

  四、物镜转换

  使用低倍镜后换用高倍镜,学生往往喜欢用手指直接推转物镜,认为这样比较省力,但这样容易使物镜的光轴发生偏斜,原因是转换器的材料质地较软,精度较高,螺纹受力不均匀很容易松脱。一旦螺纹破坏,整个转换器就会报废。教师应指导学生手握转换器的下层转动扳转换物镜。

  五、光学玻璃清洗

  光学玻璃用于的镜头、棱镜、镜片等。在制造和使用中容易沾上油污、水湿性污物、指纹等,影响成像及透光率。清洗光学玻璃,应根据污垢的特点、不同结构,选用不同的清洗剂,使用不同的清洗工具,选用不同的清洗方法。清洗镀有增透膜的镜头,如照相机、幻灯机、显微镜的镜头,可用20%左右的酒精和80%左右的乙醚配置清洗剂进行清洗。清洗时应用软毛刷或棉球沾有少量清洗剂,从镜头中心向外做圆运动。切忌把这类镜头浸泡在清洗剂中清洗,清洗镜头时不要用力擦拭,否则会损伤增透膜,损坏镜头。

  清洗棱镜、平面镜的方法,可依照清洗镜头的方法进行。

  使用上述清洗剂也能清洗光学玻璃上的油脂性雾、水湿性雾和油水混合性雾,其清洗方法和清洗镜头的方法相似。

  光学玻璃表面发霉,是一种常见现象。当光学玻璃生霉后,光线在其表面发生散射,使成像模糊不清,严重者将使仪器报废。光学玻璃生霉的原因多是因其表面附有微生物孢子,在温度、湿度适宜,又有所需“营养物”时,便会快速生长,形成霉斑。对光学玻璃做好防霉防污尤为重要,一旦产生霉斑应立即清洗。

标签: 光学显微镜
光学显微镜 光学显微镜的使用要点_光学显微镜

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