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液相色谱仪柱压问题处理方法 液相色谱解决方案

时间:2020-05-17    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     
  液相色谱仪是一种常见的液相色谱仪,这种仪器具有“四高一广”的特点,既高压、高速、、高灵敏、应用范围广。作为常见的科研分析仪器,在确保检验的准确性的同时,液相色谱做到了色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点,是科研人员进行研究的有利工具。
 
  当然作为一款精密仪器,液相色谱仪对于操作具有一定的要求,而在使用时,难免可能发生一定的问题,今天我们就来讲讲面对柱压问题,使用液相色谱仪应该注意的要点。
 
  对于液相色谱仪来说,柱压的稳定与色谱图峰的好坏、柱效、分离效果及保留时间等都有所关联。一般来说,柱压问题主要集中在压力过高、压力过低两方面。
 
  压力过高
 
  压力过高一般指液相色谱仪使用时压力突然升高的问题。
 
  原因1:流路中存在堵塞
 
  解决方法:进行分段检查。首先断开真空泵的入口处,此时PEEK管里充满液体,使PEEK管低于溶剂瓶,看液体是否自由滴下,如果液体不滴或缓慢滴下,则是溶剂过滤头堵塞。处理方法用30%的硝酸浸泡半个小时,在用超纯水冲洗干净。
 
  打开Purge阀,使流动相不经过柱子,如果压力没有明显下降,则是过滤白头堵塞。处理方法将过滤白头取出,用10%的异丙醇超声半个小时。如果压力降至100PSI以下,过滤白头正常。
 
  把色谱柱出口端取下,如果压力不下降,则是柱子堵塞。处理方法:如果是缓冲盐堵塞,则用95%的水冲至压力正常。如果是一些强保留的物质导致堵塞,则要用比现在流动相更强的流动相冲至压力正常。假如按上面的方法长时间冲洗压力都不下降,则可考虑将柱子的进出口反过来接在仪器上,用流动相冲洗柱子。这时,如果柱压仍不下降,只有换柱子入口筛板,但一旦操作不甚,很容易造成柱效下降,所以尽量少用。问题无法解决可考虑更换色谱柱。
 
  原因2:流速设定不正确
 
  解决方法:重新设定正确流量。
 
  原因3:流动相配比不正确
 
  解决方法:不同配比的流动相其黏度系数不相同,较高黏度的流动相相应的系统压力也大,如果可能可更换黏度较小的溶剂或重新设定配比。
 
  原因4:系统压力零点漂移
 
  解决方法:调节压力传感器的零点。
 
  压力过低
 
  原因1:系统泄漏
 
  解决方法:寻找各个接口处,特别是色谱柱两端的接口,把泄漏的地方旋紧即可。拆下柱子加适当力拧紧或衬四氟薄膜。
 
  原因2:泵里进混入空气,此时表现的往往是压力不稳,忽高忽低,更严重一点会导致泵无法吸上液体
 
  解决方法:打开Purge阀,用3~5ml/min的流速冲洗,如果不行,则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。
 
  原因3:无流动相流出
 
  解决方法:检查储液瓶中有无流动相,沉子是否浸在流动相中,泵是否运行。
 
  原因4:参比阀未关闭
 
  解决方法:将流速降低后关闭参比阀。一般降至0.1~0.2mL/min后关闭参比阀。

液相色谱柱的安装

  液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分组成,其中液相色谱柱的正确安装和使用,是液相色谱工作的关键;也是液相色谱工作者获得正确可靠的实验数据的必经之路。  液相色谱柱的安装:  1、液相色谱柱的结构:  a、空柱由柱接头、柱管及滤片组装而成。  柱接头采用低死体积结构,柱接头是两端螺纹组件,一端是为7/16英寸外螺纹,另一端是3/16英寸的内螺纹(国内外已规范化)。7/16英寸外螺纹与1/4英寸柱管(Φ6.35mm)连接,中间放置压坏用于密封。3/16英寸的内螺纹与1/16英寸(Φ1.57mm)的连接管连接,中间也放置压环用于柱接头的密封。为了尽量减少柱外死体积,在安装色谱柱时,用Φ1.57mm连接管通过空心螺钉压环后要尽量插到底,然后再拧紧空心螺钉。压环被空心螺钉挤压变形后紧箍在连接管上(连接管通过压环后露出的管长度应严格控制在2.5mm长或其他固定尺寸)。  在两端柱接头内,柱管两端各放置一片不锈钢滤片(或滤网),用于封堵柱填料不被流动相冲出柱外而流失。空柱各组件均为316#不锈钢材质,能耐受一般的溶剂作用。但由于含氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀。  b、柱填料:  液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的,柱子的分类是依据填料类型而定。  正相柱:多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种,其颗粒直径在3—10 ?m的范围内。另一类正相填料是硅胶表面键合—CN,-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。  反相柱:主要是以硅胶为基质,在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。  常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等,其颗粒粒径在3—10 ?m之间。

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液相色谱柱填装程序

  液相色谱柱、特别是高效液相色谱柱的填装,需要有较高的技巧和熟练的技能。因此,有人甚至将“装柱”看作是“艺术加技术”。但是,只要掌握了一些基本的规律和方法,任何实验室都可以填装出具有较高柱性能的色谱柱。当然,目前大多数实验室多是购买商品预填装柱来满足分离、分析之需。但是在一些有特殊需要的情况下,或为节省经费,在实验室中自行填装高效液相色谱柱还是可取的。

  液相色谱柱填装程序中应该注意的问题:

  ①高压操作的安全问题。常发生的问题是柱子与匀浆罐连接不牢,造成加压时柱头被高压冲下或柱子从匀浆罐上滑脱。此时,轻则填装失败,材料损失,重则造成人身伤害事故,一定要加以防范。除每次填装前均须仔细确认是否连接正确且牢靠外,可以还可加上由法兰盘和长螺杆组成的预防脱落装置,以防万一。

  ②通常,先填装的柱床较后填装的柱床紧密。因此,当使用时宜以相反的方向为宜,即让近匀浆罐一端作为使用时流动相的出口,而填装时的出口端则作为流动相的入口。

  ③新柱子使用前应以甲醇冲洗20-30min, 后,再改用流动相平衡。

  ④新柱子宜选适宜的标准样品进行评价并记录,以备存查和比较。

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