1、一般定性 用已知物和直接对照法定性，这是一种相对可靠的方法，主要可以分为以下四种： 1）保留时间和保留体积 2）相对保留值 3）已知物增加峰高法 4）双柱货双体系 实验表明，各类同系物在两根不同柱上的Vg值有如下关系：
式中：VgI表示在柱I上的比保留体积；VGII表示在柱II上的比保留体积；A1与C1为常数。 从上式可以看出，同系物在两个性质不同的色谱柱上，比保留体积Vg的对数有线性关系，下图就是根据某些化合物和领苯二甲酸二异葵酯柱上的比保留体积的对数制作出的。 经过领苯二甲酸二异葵酯柱分离后，在lgvgII为1.8的位置上有一个未知峰，由图可看出有两种可能性，即酮与伯醇；此时，将样品在柱上I上进行分离，得到lgVgII为1.62的色谱峰，从而可确定该峰是酮而不是醇。 在液相色谱中，可用双体系定性，通过改变流动相和固定相，从而改善分离的选择性，通常改用与原色谱体系有较大差别的其他色谱体系来实现分离。 2、保留值分随份子结构或性质变化的规律 1）GC中的碳数规律：同系物间，在一定温度下，保留值变化遵循如下规律：
2）GC中的沸点规律：同族具有相同碳原子数目的同分异构体间存在如下关系：
3)LC中的保留值规则：对于份子中存在不同数目的重复官能团的化合物，有如下的经验公式：
3、反向液谱的定性 在气谱中广泛使用的Kovats指数定性，在夜谱中，由于组分的保留行为不仅与固定相有关，还与流动相的种类及浓度有关，所以不能直接用同系物间，在一定温度下，保留值变化遵循如下规律指数定性。 4、计算机检索 计算机不仅都能贮存大量保留指数，而且还可以将库中标准数据转换为用户色谱条件下保留指数和tR值，靠检索功能定性。 5、色谱中的辅助技术 液相色谱，对于未知物结构的确定，也常常使用一些辅助技术，常用的有质谱，红外，核磁等。 使用非在线联用技术时，首先将色谱分离后的纯样品收集。
自动进样器的故障容易被发现，有时液相色谱仪系统出了故障而不能确定是否是进样器故障，可以用手动进样几次，或用一台好的自动进样器代替，如排除了故障，说明自动进样器有了问题。不同厂商的自动进样器差异很大，除一些共性故障外，较好查阅操作手册或与供应商联系。
除自动进样器机械、控制系统可能出现故障外，在操作及方法学方面也可能出现相应的问题，这里主要根据自动进样器的设计特点，对试验过程中可能出现的问题进行说明。
一、滞后体积
高效液相色谱仪中滞后体积是指流动相混合器到柱头的体积，包括溶剂混合器和混合器到柱头之间连接管的体积，对于低压混合系统，也包括泵体积。滞后体积较大可能导致实验的重复性差、方法移植困难。通常的HPLC系统中，滞后体积一般在0.2mL～5mL之间，主要取决于装置的设计。
滞后体积中较重要的部分为自动进样器的定量环体积。只有定量环体积小于100μL时，其对滞后体积的影响才可以近似不计。当定量环体积较大时，这种影响将表现出来。例如，采用50μL的定量环时滞后体积为300μL，如果改用1mL定量环，滞后体积将变成1250μL，这种变化直接影响到色谱分离结果。在实际分离过程中，采用的色谱柱较细时，必须考虑滞后体积的影响，解决的办法为更换较小的定量环，减小滞后体积。
二、样品瓶过满
如果样品瓶过满，在瓶盖较紧、进样量较大的情况下，可能会导致进样重复性变差。其原因为样品瓶中的样品被抽出时，盖紧的瓶盖不能使空气及时进入，造成部分真空。由于这种真空作用，注射器不能够吸取足够量的样品体积。在极端的情况下，对于挥发性稀溶液样品，针内甚至会出现气泡，影响分析工作的正常进行。
有些自动进样器采用加排空针的方法克服这一问题，但这种方法并不常用。较简单的解决办法为不要使样品瓶过满。一般装样量在样品瓶的1／2到3／4之间较为适宜。
三、进针深度的调节
样品量足够多时，不必考虑这一问题。但对于痕量分析而言，进针深度的调节问题将较为突出。理想的情况下可以使进针深入到接近样品瓶底部，这样可以较大限度地利用样品。当可用的样品体积有限时，可以采用微量样品瓶以增加给定体积样品的相对深度。如果进针过深，可能插入样品瓶的底部，甚至导致针尖阻塞。如果进针深度不足，样品只及针尖部分，针将不能抽取足够量的样品，部分空气取而代之。
对于进针深度的调节，一般采用机械或电动的方法，目前大部分厂商可以在液相色谱仪色谱工作站上设置。无论采用哪种方法，实验之前都必须认真调节，更换样品瓶类型时还需要重新调整。
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