液相色谱仪作为一种分离技术和方法，目前已经发展到一个全新的阶段。高精度的输液泵，应用广泛的色谱分离柱，低噪音、高灵敏度的各种检测器和功能强大的数据处理软件系统的出现，都推动了液相色谱技术的迅猛发展。液相色谱仪正以它分辨率高、分析速度快和应用广泛的优点倍受仪器分析工作者的青睐，广泛地应用于医药卫生、环境监测、食品检测等领域。

　　应用HPLC技术在血药浓度、生物胺、核苷酸、蛋白质浓度测定等实际工作中，积累了许多的方法和经验，在这里与大家交流，希望能对同行们有所帮助和借鉴，共同促进液相色谱分析技术的发展。

　　液相色谱仪使用过程中常见问题分析

　　（一）柱压问题

　　柱压过高，导致这种情况的直接原因可能是色谱分离柱或进样器流动不畅通。出现这种情况的根本原因可能是流动相抽滤不干净，存有杂质，从而堆积在色谱柱或过滤器中，这时只要重新配置一遍流动相。解决“堵”的方法就是检查色谱分离柱，确定其流动是否畅通，具体操作是在泵工作的情况下将色谱柱的出口处拧开，看看是否有流动相流出，同时可以调节流速，观察流动相流出的流量，进而判断色谱柱是否堵了。还有一些原因，比如：流动相的流速过大（一般为1.0ml/min）、流动相的成分不符合标准（没有使用HPLC级别的试剂或者没有超声完全）等。这些按照药典调整成正确的设置即可。如果怀疑是在线过滤器堵了可以关闭排液阀，断开出口管路，设定流速为1ml/min，如压力>3kgf/cm2，则可能堵塞，可以考虑将其置于5%稀硝酸，超声波清洗一段时间。zui后在检测验样品的时候加一个保护柱。有时候也会柱压过低，发生这个原因主要是连接不牢固，导致漏液，拧紧即可。更换流动相时没有进行脱气，导致仪器里面进入空气，一般的解决方法就是卸下超声清洗，然后进行脱气。

　　（二）基线漂移

　　在色谱仪启动之前，通常先启动半个小时后再进行操作，这样做是避免基线漂移。出现这种现象的原因很多，其一是色谱柱温差变化大，需要控制柱温，用色谱纯，也可多抽滤几次，除去醇溶性流动相外的其他流动相要勤更换，做到现配现用，以免滋生微生物，堵塞进样通道，造成基线不稳定，影响出峰。第三个原因是流路本身长期进样没有时间保养积淀的杂质。解决方法是用洗脱剂冲洗样品流动的通道，对于反相色谱系统的流动相甲醇-水系统，按照梯度洗脱的方法冲洗掉系统和色谱柱中的杂质，以免影响样品的质量。必要时可以用异丙醇。第四个可能性就是由于紫外灯的使用寿命到了，不能再继续工作，解决方法是换紫外灯。zui后是样品本身性质的影响，对于流动相的影响较大，解决方法就是用保护柱检测样品，以免出现问题。

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