紫外分光光度计基本工作原理
紫外分光光度计特点和主要用途:
紫外可见光谱仪涉及的波长范围在有机化学研究中得到广泛的应用。通常用作物质鉴定、纯度检查,有机分子结构的研究。
在定量方面,可测定结构比较复杂的化合物和混合物中各组分的含量,也可以测定物质的离解常数,络合物的稳定常数,物质分子量鉴别和微量滴定中指示终点以及在液相色谱中作检测器等。
紫外分光光度计基本工作原理:
紫外分光光度计基本工作原理和红外光谱仪相似,利用一定频率的紫外可见光照射被分析的有机物质,引起分子中价电子的跃迁,它将有选择地被吸收。
一组吸收随波长而变化的光谱,反映了试样的特征。在紫外可见光的范围内,对于一个特定的波长,吸收的程度正比于试样中该成分的浓度,因此测量光谱可以进行定性分析,而且根据吸收与已知浓度的标样的比较,还能进行定量分析。
紫外可见分光光度计来自于美国,产品包含光源,单色器,吸收池,检测器和显 示器等,它是一款对物质进行定性,定量以及结构分析的仪器。这款仪器和人们常 用的可见光光度计有有很大的区别,除了波长范围,使用光源都不一样等,价格也 是后者要要贵一些;平时的使用和注意事项不一样的,今天就先来学习一下紫外可见分光光度计使用方法: 1.试验中所用的量瓶、移液管均应经检定校正、洗净后使用。 2.使用的石英吸收池必须洁净。用于盛装样品、参比及空内溶液的吸收池,当装 入同一溶剂时,在规定波长测定吸收池的透光率,如透光率相差在0.3%以下者可配 对使用,否则必须加以校正。 3.取吸收池时,手指拿毛玻璃面的两侧。装盛样品溶液以池休积的4/5为度,使用 挥发性溶液吋应加盖,透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净,检视应无残留溶剂。 为防止溶剂挥发后溶质残留在池子的透光面,可先用蘸有空白溶剂的擦镜纸擦拭, 然后再用干擦镜纸拭净。吸收池放入样品室时应注意每次放入方向相同。使用后用 洗液及水冲洗干净,晾干防尘保存,吸收池发现污染不易洗净时可用硫酸发烟硝酸(3 :1V/V)混合液稍加浸泡后,洗净备用。如用重铬酸钾清洁液清洗时,吸收池不贫在 清洁液中长时间浸泡,否则清洁液中的重铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面,并 应充分甩水冲洗,以防重铬酸钾吸附于吸收池表面。 4.测定前应先检查所用的溶剂在测定供试品所用的波长附近是否符合要求,可用 lcm石英吸收池盛溶剂以空气为空白(即参比光路中不放置任何物质)测定其吸收度 ,应符合规定。 5.称量应按药典规定要求。配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少,转移稀释 时所取容积一般应不少于5cm。含量测定供试品应称取2份,如为对照品比较法,对 照品一般也应称取2份。吸收系数检查也应称取供试品2份,平行操作,每份结果对 平均值的偏差应在±0.5%以内。作鉴别或检查可取样品1份。 6.供试品测定溶液的浓度,除各该品种项下已有注明者外,供试品溶液的吸收度 以在0.3~0.7之间为宜,吸收度读数在此范围误差较小,并应结合所用仪器吸收度线 性范围,配制合适的读数浓度。 7.选用仪器的狭缝谱带宽度应小于供试品吸收带的半宽度,否则测得的吸收度值 会偏低,狭缝宽度的选择应以减小狭缝宽度吋供试品的吸收度不挥增加为准,对于 紫外测定的部分品种,可以使用2nm缝宽,但对某些品种如青霉素钾及钠的吸收度 检查则需用lnm缝宽或更窄,否则其264nm的吸收度会偏低。 8.测定时除另有规定者外,应在规定的吸收峰±2nm处,再测几点的吸收度,以核 对供试品的吸收峰位置是否正确,并以吸收度最大的波长作为测定波长,除另有规 定外吸收度最大波长应在该品种项下规定的波长±lnm以内,否则应考虑试样的同一 性、纯度以及仪器波长的准确度 9.除另有规定外,比色法所用的空内系指用同休积的溶剂代替对照品或供试品溶 液,然后依次加入等量的相应试剂,并用同样方法处理。 10.当吸收度和浓度关系不呈线性关系时,应取数份梯度量的对照浓度,用溶剂补 充至同一休积,显色后测定各份溶液的吸收度,然后以吸收度与相应的浓度绘制标 准曲线,再根据供试品的吸收度在标准曲线上求出其含量。
1、紫外可见分光光度计光度测量 在模式选择屏幕中选择<1、Photometric光度>选项,将显示参数配置屏幕; 用GOTOWL键设定测量波长; 按F2键设定进样控制; 按START/STOP键时,测量开始,显示测量屏幕; 如需做空白校正,应在测量前先设置空白样品,然后,按AUTO-ZERO键,将测量值置为OABS(100%); 2、紫外可见分光光度计校正 开机预热10分钟足矣; 放入黑块和标样(没有的自己配),关闭盖子; 校0; 把灯光对着黑块,把透光度调0; 把灯光对标样,将吸光度调到100%; 3、参比溶液介绍 参比溶液又称空白溶液。测量时用作比较的、不含被测物质但其基体尽可能与试样溶液相似的溶液。通常,用参比溶液扫描的曲线应是一条平坦的直线。有时,基体中,虽不含被测物质,但含有别的物质,这时必须保证其不影响测试。经常碰到的是试剂空白中含有被测物质,此时必须经过纯化将其除去。否则将影响测定结果。 4、紫外可见分光光度计使用注意事项 1、开机前应先预热15分钟,然后开机自检; 2、湿度要控制在75%左右,温度在5~30度之间; 3、仪器要稳压电源,接地要好。并且避免阳光直接照射; 5、常见故障及处理方法 光门不能完全关闭:修复光门部件,使其完全关闭; 透过率“100%”旋到底了。解决方法:重新调整“100%”旋钮; 仪器严重受潮:可打开光电管暗盒,用电吹风吹上一会儿使其干燥,并更换干燥剂;以上为紫外可见分光光度计的具体操作方法及使用注意事项,希望能给予您帮助。