分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息。可以用标准光图谱再结合其它手段进行定性分析。
根据Lambert-Beer定律说明光的吸收与吸收层厚度成正比，比耳定律说明光的吸收与溶液浓度成正比;如果同时考虑吸收层厚度和溶液浓度对光吸收率的影响，即得朗伯-比耳定律。即A=εbc，(A为吸光度，ε为摩尔吸光系数，b为液池厚度，c为溶液浓度)就可以对溶液进行定量分析。
将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见吸收光谱。若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。如果没有标样，也可以和现成的标准谱图对照进行比较。这种方法要求仪器准确，精密度高，且测定条件要相同。
实验证明，不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同，这可以利用紫外光谱来判断化合物在不同溶剂中氢键强度，以确定选择哪一种溶剂。
在水和废水监测中的应用，对于一个水系的监测分析和综合评价，一般包括水相(溶液本身)、固相(悬浮物、底质)、生物相(水生生物)。在水质的常规监测中，紫外可见分光光度法占有较大的比重。由于水和废水的成分复杂多变，待测物的浓度和干扰物的浓度差别很大，在具体分析时必须选择好分析方法。
在农产品和食品分析中可用于检测的组分或成分有蛋白质、赖氨酸、葡萄糖、维生素C、硝酸盐、亚硝酸盐、砷、汞等;
在植物生化分析中可用于检测叶绿素、全氮和酶的活力等;
在饲料分析中可用于检测烟酸、棉酚、磷化氢和甲酯等。
现今，国内大部分的可见分光光度计，紫外可见分光光度计有所改良。随着行业的进步，技术改良，部分厂家对于灯源更换问题的重视程度也越来越高，灯源更换也越来越方便简捷。很多新机型甚至不需要拆下整机外壳，只要打开灯源不为的盖子就能更换灯源。
分光光度计使用过程中的注意事项：分光光度计使用过程中，在不使用紫外光的情况下可以关闭氘灯（国内很多机型现在都使用的进口氘灯，用的贺利氏的氘灯较多，一般使用寿命在2000小时，国产的氘灯一般寿命在1000小时左右），关闭氘灯的话可以降低氘灯的能量损耗
分光光度计更换过程中的注意事项：
1、 关闭电源
2、 拔除电源线
3、 打开盖子到灯源部位
4、 如果是分光光度计刚使用结束，要等10分钟后在进行更换灯源（灯源刚使用完，温度比较高，防止烫到手）
5、 放电，将电路残余电压释放掉（可以接两根线到地表完成放电操作）
老款机型钨灯的更换（主要讲国产的）：
1、第一点很重要，就是带上手套，否则会污染钨灯，如果没有条件的话也要把手洗干净，防止手上的污迹污染钨灯
2、需要量取钨灯灯丝距离底座的立体位置（简单的说，距离分光光度计内三个面的位置），可以用游标卡尺量
3、部分钨灯是可以直接拔的，还有些钨灯需要用螺丝刀拆卸，也有需要通过扳手旋松的，简单讲述，就是拆下钨灯，在带手套的情况下可以直接接触灯源，未带手套的情况下，尽量避免接触灯源，拿的时候可以钨灯底座的两个触角
4、装钨灯，先把钨灯装上，起初不要把螺丝旋太紧，因为还需要调整位置
5、接下来，第二步做的工作就能用到了。根据第二步测量的位置调整钨灯，上下左右移动，直到把钨灯调整到预先测量的位置
说明
氘灯原本在可见区是没有能量的，但是却在656.1nm处出现一条氘灯的特定谱线，当氘灯的发射光束达到较佳位置时，这条特殊的谱线峰值也会达到最高，仪器正是利用这个峰值变化来监控氘灯是否调整到较佳位置的。
6、略微紧固螺丝（切记不要太紧）接入电源，打开开关，看下光斑是否打在了狭缝上，如果未打在狭缝，可以通过紧固左右螺丝来微调光斑的位置
7、钨灯更换完毕
老款机型氘灯的更换（主要讲国产的）：
1、 跟更换钨灯一样，就是带上手套，否则会污染氘灯，如果没有条件的话也要把手洗干净，防止手上的污迹污染氘灯，手指避免接触光源中心发射空位置
2、 量取发射孔的立体位置
3、 松开氘灯底座三根引线
4、 旋松螺钉，收向上推氘灯底部
5、 根据之前量取角度拜访氘灯位置，将放射孔位置调整至之前量取位置
注意事项：
(1) 光源镜背部的螺钉A为灯光束垂直方向的调整螺钉，该螺钉调整时要兼顾两个灯的能量，但主要照顾氘灯的能量，因为氘灯的能量是钨灯的1/5。
(2) 虽然大多情况下仅仅更换一只光源灯，但调整时两只灯的情况均要兼顾检查。
(3)调整后要做仪器基线平坦度及噪声水平的测试，以检验调整的效果。
(4)不同的分光仪器的灯室构造可能有所不同，但调整思路基本是一通百通的，本文仅能起到抛砖引玉的作用。
6、 开启电源，点亮氘灯，调至度数最高，旋紧螺钉即可
新款机型钨灯的更换不带灯座的步骤同上，带灯座的，直接安装，安装后只要调整螺丝松紧就能调节光斑，氘灯也是如此 。
光源灯更换后为何要调整？
分光光度计有一个技术指标，称为“基线噪声”，也就是“信噪比”，英文表示为S/N；简单地讲信噪比越大测量的结果精度越高。要想达到较佳信噪比，光源的调 整就凸现重要了；关于这个调整的物理意义，用仪器术语解释：就是让光源灯发出的实际光束与光路理论光轴完全重合。用形象语言解释：就是让光源发出的光束的 较强点完全照射到仪器单色器的入口狭缝的中央处。
由于安装光源灯的灯座一般是固定式的，加之每支灯的构造的微小差异，致使其发射出的光束在三维空 间中的位置也不尽相同；所以更换光源灯后，很难保证光束的较强点照射到狭缝的中央处，这是客观存在。为此、唯一可以补偿这一缺憾的办法就是调整光源镜的反 射角度。但是对于许多使用者而言，往往不清楚这个调整步骤的重要性。一般来讲、含有氘灯和钨灯两种光源的仪器的光源镜均可以调整。
紫外可见分光光度计来自于美国，产品包含光源，单色器，吸收池，检测器和显 示器等，它是一款对物质进行定性，定量以及结构分析的仪器。这款仪器和人们常 用的可见光光度计有有很大的区别，除了波长范围，使用光源都不一样等，价格也 是后者要要贵一些；平时的使用和注意事项不一样的，今天就先来学习一下紫外可见分光光度计使用方法： 1.试验中所用的量瓶、移液管均应经检定校正、洗净后使用。 2.使用的石英吸收池必须洁净。用于盛装样品、参比及空内溶液的吸收池，当装 入同一溶剂时，在规定波长测定吸收池的透光率，如透光率相差在0.3%以下者可配 对使用，否则必须加以校正。 3.取吸收池时，手指拿毛玻璃面的两侧。装盛样品溶液以池休积的4/5为度，使用 挥发性溶液吋应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无残留溶剂。 为防止溶剂挥发后溶质残留在池子的透光面，可先用蘸有空白溶剂的擦镜纸擦拭， 然后再用干擦镜纸拭净。吸收池放入样品室时应注意每次放入方向相同。使用后用 洗液及水冲洗干净，晾干防尘保存，吸收池发现污染不易洗净时可用硫酸发烟硝酸(3 ：1V/V)混合液稍加浸泡后，洗净备用。如用重铬酸钾清洁液清洗时，吸收池不贫在 清洁液中长时间浸泡，否则清洁液中的重铬酸钾结晶会损坏吸收池的光学表面，并 应充分甩水冲洗，以防重铬酸钾吸附于吸收池表面。 4.测定前应先检查所用的溶剂在测定供试品所用的波长附近是否符合要求，可用 lcm石英吸收池盛溶剂以空气为空白（即参比光路中不放置任何物质)测定其吸收度 ，应符合规定。 5.称量应按药典规定要求。配制测定溶液时稀释转移次数应尽可能少，转移稀释 时所取容积一般应不少于5cm。含量测定供试品应称取2份，如为对照品比较法，对 照品一般也应称取2份。吸收系数检查也应称取供试品2份，平行操作，每份结果对 平均值的偏差应在±0.5%以内。作鉴别或检查可取样品1份。 6.供试品测定溶液的浓度，除各该品种项下已有注明者外，供试品溶液的吸收度 以在0.3~0.7之间为宜，吸收度读数在此范围误差较小，并应结合所用仪器吸收度线 性范围，配制合适的读数浓度。 7.选用仪器的狭缝谱带宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度值 会偏低，狭缝宽度的选择应以减小狭缝宽度吋供试品的吸收度不挥增加为准，对于 紫外测定的部分品种，可以使用2nm缝宽，但对某些品种如青霉素钾及钠的吸收度 检查则需用lnm缝宽或更窄，否则其264nm的吸收度会偏低。 8.测定时除另有规定者外，应在规定的吸收峰±2nm处，再测几点的吸收度，以核 对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸收度最大的波长作为测定波长，除另有规 定外吸收度最大波长应在该品种项下规定的波长±lnm以内，否则应考虑试样的同一 性、纯度以及仪器波长的准确度 9.除另有规定外，比色法所用的空内系指用同休积的溶剂代替对照品或供试品溶 液，然后依次加入等量的相应试剂，并用同样方法处理。 10.当吸收度和浓度关系不呈线性关系时，应取数份梯度量的对照浓度，用溶剂补 充至同一休积，显色后测定各份溶液的吸收度，然后以吸收度与相应的浓度绘制标 准曲线，再根据供试品的吸收度在标准曲线上求出其含量。
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