紫外可见分光光度计在生物学的应用分析中, 常见的有蛋白质含量检测;一般是在蛋白质的吸收峰上作吸光度测定。因为蛋白质对紫外光的主要吸收波长为280nm, 所以, 采用光度测量模式, 将仪器的波长GOTO 到蛋白质的最大吸收峰波长280nm 上, 测试其吸光度大小, 就可完成对蛋白质的定量检测。
目前, 紫外可见分光光度计的应用主要是在定量分析方面。先从生命科学领域的应用来介绍。紫外可见分光光度计在生命科学中应用非常广泛。最主要的是以下5 个方面。
1. 蛋白质分析工作中的应用
紫外可见分光光度计在蛋白质的分析中, 最主要的是作蛋白质含量检测;一般是在蛋白质的吸收峰上作吸光度测定。因为蛋白质对紫外光的主要吸收波长为280nm, 所以, 采用光度测量模式, 将仪器的波长GOTO 到蛋白质的最大吸收峰波长280nm 上, 测试其吸光度大小, 就可完成对蛋白质的定量检测。
2. 核酸分析工作中的应用
紫外可见分光光度计在核酸分析中的应用, 主要是用来对核酸的定量检测; 因为核酸的吸收峰在260nm。我们只要采用光度测量模式, 将紫外可见分光光度计的波长GOTO 到核酸的最大吸收峰260nm 上, 测试其吸光度大小就是了。
3. 氨基酸分析工作中的应用
紫外可见分光光度计在氨基酸分析中的应用, 主要是用来对氨基酸的定量检测。因为氨基酸对紫外光的主要吸收波长为230nm, 所以, 我们只要采用光度测量模式, 将紫外可见分光光度计仪器的波长GOTO 到氨基酸的最大吸收峰230nm 上, 就可测试其吸光度大小, 从而计算出氨基酸的含量。但是, 因为氨基酸分析时, 一般是将它溶解在水中, 而水在230 nm 附近有很多干扰吸收线, 所以, 在用紫外可见分光光度计对氨基酸分析检测时, 要注意防止干扰的问题。此外, 还需注意: 只有少数氨基酸有紫外吸收, 多数氨基酸无紫外吸收或很弱, 测定时要衍生化后再测。
4. 糖类分析测试工作中的应用
紫外可见分光光度计在糖的分析中, 主要是作定量检测。因为糖对紫外光的主要吸收波长为218nm, 所以, 对糖类进行分析时, 只要采用光度测量模式, 将紫外可见分光光度计仪器的波长GOTO 到氨基酸的最大吸收峰218 nm上, 就可测试其吸光度大小, 从而计算出糖的含量。
5. 多糖分析测试工作中的应用
紫外可见分光光度计在多糖的分析中, 主要也是作定量检测。因为多糖对紫外光的主要吸收波长为206nm, 所以, 我们只要采用光度测量模式, 将紫外可见分光光度计仪器的波长GOTO 到多糖的最大吸收峰206 nm 上, 就可测试其吸光度大小, 从而计算出多糖的含量。
但是多糖的分析难度很大。因为, 在206 nm 处的时候, 光源(氘灯) 的能量已经很弱, 仪器光学系统的能量输出也很低, 光电倍增管的灵敏度也很低, 206nm 左右的干扰也很大。所以, 用紫外可见分光光度计作多糖的分析是很难的事, 目前许多科学家正在研究中。
关于可见分光光度计的使用环境也有很多说法，当然了除了使用环境之外还有使用时的注意事项。
那么具体都有哪些呢?下面我们就来一起看看吧。
可见分光光度计的工作环境
1、仪器应该安放在干燥的房间内，环境温度为5°C~35C， 相对湿度不超过85%.
2、使用时放置在坚固平稳的工作台上，且避免强烈的震动或持续的震动。
3、室内照明不易太强，且避免直射日光的照射。
4、电扇不易直接向仪器吹风，以免因气流影响仪器的正常使用。
5、尽量远离高强度的磁场、电厂及发生高频波的电器设备。
6、工作电压为AC220V土22V,频率为50Hz土1Hz
7、避免在有硫化氢、亚硫酸氟登腐蚀气体的场所使用。
可见分光光度计使用注意事项
1、当仪器停止工作时，应关闭仪器电源开关，在切断电源。
2、为了避免仪器积灰和沾污，在停止工作的时间里，用防尘罩罩住仪器，同时在罩子内放置数袋防潮剂，以免灯室受潮、反射镜镜面发霉或沾污，影响仪器日后的工作。
3、仪器工作数月或搬动后，要检查波长准确度，以确保仪器的使用和测定精度。
4、每次使用仪器后应对比色架进行清洁，防止样品对比色皿架的腐蚀。
紫外可见分光光度计使用环境温度尽可能保持在15-30摄氏度，这样才能保持电器元件稳定工作，且不易老化，从而使分光光度计不易损坏，灯源的使用寿命更久。
如果不具备这样的室温条件，即在高温的情况下，也要尽量缩短分光光度计开机时间，从而高效使用分光光度计，避免电器元件长期在高温下运转。如在低温下，使预热时间比常温下的预热时间要长，这样才能保证在仪器稳定的情况下进行测试使用；
荧光分光光度计与紫外分光光度计属一类产品，结构均由激发光源、单色器、样品室、光电倍 增管和读出（记录）装置所组成。但是它们光源是不同的，荧光分光光度计多采用高压汞灯、氙灯和激光光源。同时，荧光测量多采用激发光和发射光成直角的光路，仪器组件的布置有所不同。 下图为某型号荧光分光光度计的光学系统图，其主要工作原理是：当光源光束经入射单色器色散，提取所需波长单色光照射于样品上，由样品发出的荧光经发 射单色器色散后照射于光电倍增管，光电倍增管把荧光强度信号转化成电信号并经放器放大后记录或读出信号。
荧光分光光度计的光学系统图
1.氙灯（150W）；2.透镜；3.光束分裂器；4.水平狭缝；5.激发单色器光栅；6.参考放电管；7.关闸；8.样品室关闸；10.发射单色器光栅；12.光电倍增管 (1)激发光源：要比吸收法中光源强度大。 汞灯：发射强度大、稳定，不需复杂电源，但谱线不连续，数目少，主要用于滤片荧光计。 碘钨灯：提供连续光谱300~700mn。 氙灯：发出射线的强度大，谱线连续，分布于200~700 nm光域内，且在300~400nm 波段内射线强度几乎相等，但该灯的电源功率要求大，且电源稳定，因此电源结构复杂。 激光：发光强度大，能极大地提高荧光分析的灵敏度。 (2)样品池：通常由石英池（液体样品用）或固体样品架（粉末或片状样品）组成。测量液体时，光源与检测器成直角安排；测量固体时，光源与检测器成锐角安排。低温荧光测定时在一样品池外套一个液氮的透明石英真空瓶。 (3)单色器：荧光分光计通常具有两个滤光片：第一滤光片在光源与样品池之间，滤去不需要的光，让需要的激发光通过。第二滤光片在样品池与检测器之间，滤去溶剂散射 光、容器表面散射光、杂质发出的光等，让待测物质发射的荧光通过。 荧光分光光度计通常具有两个光栅，位置同滤光片，单色性好。 (4)检测器：因荧光通常较弱，采用光电倍增管作检测器，灵敏度高。选择光电倍增管要考虑：响应波长、灵敏度和嗓声水平。 蓝敏管对蛋白质、核酸的测量适用，而红敏管则适用于荧光染料检测。 (5)显示系统：光度表、计算机操作系统等。 补充说明：与紫外分光光度计的结构区别： 1.荧光分光光度计采用的是垂直的测量方式，以消除透射光的影响。 2.检测器前面有无单色器，荧光分光光度计有两个单色器又上图可以看出，能够获得单色性较好的激发光并消除其他杂散光干扰。
正确了解荧光分光光度计的结构，也是能够帮助我们更好使用和操作，一定要仔细阅读哈~
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