X
你好,欢迎来到仪多多。请登录 免费注册
仪器交易网
0我的购物车 >
购物车中还没有商品,赶紧选购吧!

液相色谱柱的使用和维护规程 液相色谱选购指南

时间:2020-05-30    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     

一、简介


在我们平常的工作当中,液相色谱柱的正确使用和维护十分重要,液相色谱柱使用是否得当,直接影响液相色谱柱的寿命,稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。


二、液相色谱柱的使用和维护规程


在液相色谱操作过程中,我们需要下面的问题,方便维护液相色谱柱。
A柱子在装卸、更换时,动作要轻,接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动,以免柱床产生空隙。


B.如果仪器用来做常规分析,样品种类有限,但分析次数多,则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱,这样有助于延长柱子的寿命。 


C.避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使液相色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料,因此在调节流速时应该缓慢进行,在阀进样时阀的转动不能过缓。


D.应逐渐改变溶剂的组成,特别是反相色谱中,不应直接从有机溶剂改变为全部是水,反之亦然。


E.如使用柱温控制装置时,应注意在通人流动相后才能升温。


F.一般说来液相色谱柱不能反冲,只有生产者指明该柱可以反冲时,才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。


G.选择使用适宜的流动相,以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一个预柱,分析柱是键合硅胶时,预柱为硅胶,可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”,避免分析柱中的硅胶基质被溶解。


H.避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内,需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。


I.经常用强溶剂冲洗液相色谱柱,清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时,对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡,每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右,即常规分析需要50-75mL。


J.保存液相色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇,柱接头要拧紧,防止溶剂挥发干燥。禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。


K.液相色谱柱使用过程中,如果压力升高,一种可能是烧结滤片被堵塞,这时应更换滤片或将其取出进行清洗;另一种可能是大分子进人柱内,使柱头被污染;如果柱效降低或色谱峰变形,则可能柱头出现塌陷,死体积增大。
 

L.在完成分离分析工作之后,不能马上就关机,需及时对色谱分析系统进行冲洗,一般0.5h以上,以除去液相色谱柱内的杂质。

下面为大家推荐一款成都摩尔科学仪器有限公司提供的赛分GP-C18色谱柱,如有需要欢迎搜索成都摩尔科学仪器有限公司

通用的C18反向色谱柱。

反相色谱GP-C18描述:

GP-C18以全覆盖的键合硅胶为填料,具有优异的稳定性。独特的单官能团化学键合技术可避免形成复合的C18分子层。均匀的涂层确保了固定相具有高选择性和率的分离特点。

硅胶:球形, 高纯度(金属杂质<10ppm)
孔径:120Å 
粒径:1.8、2.2、3、4、5、7和10µm 
 孔体积: 1.0mL/g
比表面积: 300m²/g
固定相结构;单层全封尾 
碳载量:17%

反相色谱GP-C18特点:

● 采用高度可控的单分子层形成和封尾技术 

● 高的柱间重现性 

● 高的选择性和分离效率

● 适合分离酸性、中性和碱性化合物,以及许多药物和多肽等 

● 推荐使用有机溶剂或有机溶剂/水体系的流动相

 

柱稳定性

     GP-C18以全覆盖的硅胶为填料,因此具有优异的稳定性。下图显示了苯胺、苯甲醚和甲苯在运行13,000倍柱体积流动相(85%甲醇:水=85:15, v/v)后保留时间依然高度重现。Sepax GP-C18的这种稳定性使其非常适合于各种分析物的确认。

 

 

    GP-C18固定相所采用的单层官能团化学键合技术可避免形成复合的C18分子层。具备这种均匀涂层的固定相具有高选择性和率的分离特点。图2是在4.6mm I.D.×250mm Sepax GP-C18柱上进行测试得到的色谱图。

 

 

订购信息:

 

 

色谱柱

 

长度x内径

粒径(µm)

孔径(Å)

订货号

30 mm x 2.1 mm
50 mm x 2.1 mm

3
3

120
120

101183-2103
101183-2105

100 mm x 4.6 mm
150 mm x 4.6 mm
250 mm x 4.6 mm

3
3
3

120
120
120

101183-4610
101183-4615
101183-4625

30 mm x 2.1 mm
50 mm x 2.1 mm

5
5

120
120

101185-2103
101185-2105

100 mm x 4.6 mm
150 mm x 4.6 mm
250 mm x 4.6 mm

5
5
5

120
120
120

101185-4610
101185-4615
101185-4625

150 mm x 10.0 mm
250 mm x 10.0 mm

5
5

120
120

101185-10015
101185-10025

150 mm x 21.2 mm
250 mm x 21.2 mm

5
5

120
120

101185-21215
101185-21225

150 mm x 30.0 mm
250 mm x 30.0 mm

5
5

120
120

101185-30015
101185-30025

150 mm x 10.0 mm
250 mm x 10.0 mm

10
10

120
120

101189-10015
101189-10025

150 mm x 21.2 mm
250 mm x 21.2 mm

10
10

120
120

101189-21215
101189-21225

150 mm x 30.0 mm
250 mm x 30.0 mm

10
10

120
120

101189-30015
101189-30025

 

 

保护柱芯

 

长度x内径

粒径(µm)孔径(Å)

包装

订货号

10mm x 2.0mm

3120

1/pk

101183-2001

10mm x 4.0mm31201/pk101183-4001
10mm x 2.0mm51201/pk101185-2001
10mm x 4.0mm51201/pk101185-4001
10mm x 2.0mm3120

2/pk

101183-2001T

10mm x 4.0mm31202/pk101183-4001T
10mm x 2.0mm51202/pk101185-2001T
10mm x 4.0mm51202/pk101185-4001T
10mm x 2.0mm31205/pk101183-2001F
10mm x 4.0mm31205/pk

101183-4001F

10mm x 2.0mm51205/pk101185-2001F
10mm x 4.0mm51205/pk101185-4001F
10mm x 21.2mm51201/pk101185-21201
 

 

保护柱套装(订货号:GUARD-KIT)

 

产品名称

包装(规格)

订货号

分析型保护柱套

10mm x2.0(4.0)mm

102000-AH

PEEK二接

7cm

102002-P355

扳手

2个

102000-WRENCH

   
制备型保护柱套10mm x21.2mm102000-21201
快速液相色谱柱选择的条件
填料基质
1.硅胶基质:纯度高本钱低,强度大,化学修饰轻易,但pH值范围有限。大多硅胶基质填料在pH2-8之间稳定,但经过特殊修饰的硅胶键合相可以稳定在pH1.5-10。
 
2.聚合物基质:应用pH值范围宽,温度稳定(高温可以达到80度以上),机械强度小。
 
颗粒外形
大多现代HPLC填料都是球形颗粒,但有时是不规则的颗粒。球形颗粒提供较低的柱压、较高的柱效和稳定性以及较长的柱寿命在使用高粘度的活动相时;不规则颗粒有较大比表面积和相对低廉的价格。
 
颗粒粒径
粒径越小柱效越高、分离度越高,但同时会导致较高柱压降。选择1.5-3μm的填料以解决一些复杂样品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒径的填料用作半制备或制备柱。
 
含碳量
含碳量指的是硅胶表面键合相的比例,与比表面积和键合覆盖度等有关。高含碳量进步柱容量、分辨率及分析时间,用于要求高分离度的复杂样品;低含碳量分析时间短、展现不同的选择性,用于快速分析简单样品及需要高含水活动相条件的样品。一般C18的含碳量在7-19%不等。
 
孔径和比表面积
HPLC吸附介质是多孔的颗粒,尽大多数的反应表面于孔内。因此,分子必须进进孔内才能被吸附和分离。
孔径和比表面积是相辅相成的两个概念。孔径小比表面积大,反之亦然。比表面积大,增加样品与键合相之间的反应,增加保存,上样量和复杂成分的分离度;比表面积小,平衡时间快,适合梯度分析。
 
孔容和机械强度
孔容,又称“孔体积”。指单位颗粒的空隙体积大小。它能很好的反应填料的机械强度。孔体积大的填料相对孔体积小的填料机械强度要略弱。孔体积为1.5mL/g或更小的填料大多用于HPLC分离,而孔体积大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色谱和低压色谱。
 
封端封端
封端能够降低极性碱性化合物由于与裸露的硅醇基相互作用而产生的拖尾峰。不封端键合相相对封端键合相会产生不同的选择性,尤其是极性样品。 

    高效液相色谱仪色谱柱在色谱分析系统中主要起着分离检测物质的作用,如同色谱系统的心脏,同时也是易损耗品。什么情况下会导致液相色谱柱柱效降低甚至“失效”。

 

    1、筛板堵塞

    色谱柱入口筛板堵塞是常见的问题之一,会导致柱压升高、色谱峰拖尾、塔板数降低等问题。通常分析样品中微粒杂质最右可能堵塞色谱柱入口,因此分析时,需要先过滤或者离心,乳浊或浑浊样品应以0.25?m滤膜处理,也可用针头过滤器过滤。进样器与泵密封垫的磨损也会带入微粒,在进样阀与色谱柱之间使用0.25?m或0.45?m的在线过滤器,通常可以避免这类问题

    2、强保留样品组分

    强吸附性的样品组分吸附在柱头填料上,能严重地影响色谱柱寿命。像生物组织或体液的提取物、天然产物等复杂样品,极易造成柱头的污染。相对较纯的样品,一般不会出现这一问题。色谱柱应用中,色谱峰严重拖尾或分裂往往是强保留污染物在柱头吸附的体现。

    3、色谱柱装填不良

    装填不良的色谱柱,在短时间应用后,填充床的压缩通常使柱头处产生塌陷,导致柱效突然降低。色谱柱的初始评价指标,如塔板数、不对称因子等往往不能很好地表征色谱柱床层的稳定性,这种情绪只能在实际应用中发现。

    4、压力因素

    液相色谱仪色谱柱使用过程中的骤然压力波动、机械撞击或温度骤然变化都会对色谱柱床层产生影响,导致峰形变差和柱效降低。进样过程中,进样阀转动太慢可引起压力波动,使色谱柱床产生裂隙,在柱切换时也存在同样的问题。使用填充良好的色谱柱,在较低柱压下操作,可大大减少由压力波动造成的色谱柱损坏。

    有些色谱柱厂家建议在使用液相色谱柱时加入保护柱,保护柱是收集、阻断来自进样器的机械和化学杂质,以保护和延长分析柱的使用寿命。

    柱子的再生

    色谱柱属于色谱分析的常用消耗品,它是有寿命的;但它寿命的长短与我们的样品处理程度、有无加保护柱以及清洗是否恰当和彻底紧密相关!当柱子在使用一段时间以后,它的柱压可能升高,柱效可能降低,这时如果我们对柱子进行再生,它的寿命也许会得到一定的延长。

    柱子使用

    1、首先要确认您所要分析的样品流动相的pH范围是否在您的柱子的pH范围之内,以免损坏柱子硅胶!

    2、接下来就是用你做样品的流动相去平衡柱子,如果您的流动相中含有缓冲盐溶液,在平衡柱子之前务必要先用5%的甲醇(乙腈)/水去过渡10倍柱体积(150x4.6mm柱子约为30ml,250x4.6mm柱子约为45ml;下同)以上,再用带盐的流动相去平衡柱子足够的时间(直到基线非常平稳为止),之后方可进样分析。

    3、无论您分析何种样品,都会由于各种原因样品中总有部分杂质,因此建议您在进样前在柱子前端加接保护柱以保护您那昂贵的分析柱,或者用0.2um或 0.45um针头过滤器过滤样品后方进样分析!



上一篇:高温高压型磁翻板液位计使用时注...

下一篇:Q-SUN 氙灯老化试验箱的选...

  • 手机多多
  • 官方微信订阅号
商品已成功加入购物车!