气相色谱柱的选择 色谱柱解决方案

    气相色谱柱的分离效果主要取决于其固定相，柱长度，柱内径，液膜厚度这几个因素，从原理上讲，这几个因素相同的柱子，其分离效果是完全一样的。

    1)柱长度的选择

    分辨率与柱长的平方根成正比。在其他条件不变的情况下,为取得加倍的分辨率需有4倍的柱长。较短的柱子适于较简单的样品,尤其是由那些在结构、极性和挥发性上相差较大的组分组成的样品。

    一般来说：

    15m的短柱用于快速分离较简单的样品，也适于扫描分析；

    30m的色谱柱是常用的柱长，大多数分析在此长度的柱子上完成；

    50m、60m或更长的色谱柱用于分离比较复杂的样品。

    应该注意，柱长增加分析时间也增加。

    2)柱内径的选择

    柱径直接影响柱子的效率、保留特性和样品容量。小口径柱比大口径柱有更高柱效，但柱容量更小。

    0.25mm：具有较高的柱效，柱容量较低。分离复杂样品较好。

    0.32mm：柱效稍低于0.25mm的色谱柱，但柱容量约高60%。

    0.53mm：具有类似于填充柱的柱容量，可用于分流进样，也可用于不分流进样，当柱容量是主要考虑因素时（如痕量分析），选择大口径毛细管柱较为合适。

    3)液膜厚度的选择

    液膜厚度影响柱子的保留特性和柱容量。厚度增加，保留也增加。

    0.1～0.2m ：薄液膜厚度的毛细管柱比厚液膜的毛细管柱洗脱组分快，所需柱温度低，且高温下柱流失较小，适用高沸点的化合物的分析。

    0.25～0.5m ：常用的液膜厚度。

    厚液膜：对分析低沸点的化合物较为有利。

    4)固定相的选择

    不同的固定相对不同的分析物的影响不同，根据相似相溶原理，性质越相近，固定相对其的流动阻力越大，其保留时间越长．色谱柱就是通过这个原理将不同性质的混合物相互分开的。

    离子交换色谱柱是指离子交换色谱中的固定相中的一些带电荷的基团，这些带电基团通过静电相互作用与带相反电荷的离子结合。如果流动相中存在其他带相反电荷的离子，按照质量作用定律，这些离子将与结合在固定相上的反离子进行交换。

    离子交换色谱柱基本原理：

    离子交换色谱是蛋白纯化技术中常用的一种纯化方法，其原理是指被分离物质所带的电荷可与离子交换剂所带的相反电荷结合，这种带电分子与固定相之间的结合作用是可逆的，在改变pH或者用逐渐增加离子强度的缓冲液洗脱时，离子交换剂上结合的物质可与洗脱液中的离子发生交换而被洗脱到溶液中。由于不同物质的电荷不同，其与离子交换剂的结合能力也不同，所以被洗脱到溶液中的顺序也不同，从而被分离出来。

    离子交换色谱柱的再生方法有两种：

    （1）先用25ml蒸馏水通过柱子以除去缓冲盐类，再用25ml甲醇冲洗，以除去由于分配效应而残存在骨架中的杂质，再用25ml蒸馏水除去不溶于甲醇的残存盐类，最后用缓冲液平衡。

    （2）先用0.1mol/L的柠檬酸洗涤，然后用水洗涤（不要用碱性溶液，以防硅胶基质溶解），最后用缓冲液平衡。