高效毛细管电泳色谱仪对进样技术要求很高,进样时应注意以下事项:
一、毛细管插入样品溶液后,应立即开始进样操作,完成后迅速移至缓冲液中开始电泳。否则会产生毛细作用和虹吸现象,引起误差并使谱带展宽。
二、电极不要和毛细管接触,样品贮器和缓冲液贮器液面的高度应保持平衡。
三、进样区带越小越好,否则会使柱效和分离度降低。故进样时间以短为宜。
四、温度会影响进样量的恒定,因温度直接影响粘度。
五、样品溶液中的溶剂必须与缓冲液互溶,前者的离子强度应低于后者。
六、防止溶液和缓冲液的蒸发、损耗。
根据分析对象,色谱柱的类型,操作仪器的挡次和具体检测器,若使用不合要求的低纯度气体,不良影响有以下几种可能: 1)样品失真或消失:如H2O气使氯硅样品水解; 2)色谱柱失效:H2O,CO2使分子筛柱失去活性,H2O气使聚脂类固定液分解,O2使PEG断链。 3)有时某些气体杂质和固定液相互作用而产生假峰; 4)对柱保留特性的影响:如:H2O对聚乙二醇等亲水性固定液的保留指数会有所增加,载气中氧含量过高时,无论是极性或是非极性固定液柱的保留特性,都会产生变化,使用时间越长影响越大。 5)检测器: TCD:信噪比减小,无法调零,线性变窄,文献中的校正因子不能使用,氧含量过大,使元件在高温时加速老化,减少寿命。 FID:特别是在Dt≤1Ⅹ10ˉ⒒/秒下操做时,CH4等有机杂质,会使基流激增,噪声加大不能进行微量分析。 ECD:载气中的氧和水对检测器的正常工作影响最大,在不同的供电工作方式中,脉冲供电比直流电压供电影响大,固定基流脉冲调制式供电比脉冲供电影响大。这就是为什么目前诸多在操作固定基流脉冲调制式ECD时,在载气纯度低时必须把载气纯度选择开关从“标准氮”拨到“一般氮”位置的原因。大家会发现在此情况下操作,不但灵敏度变低,而且线性亦变窄了。实践证明:在操作ECD时,载气中的水含量低于0.02ppm,氧低于1ppm时可达到较理想的性能。值得指出的是,我们多次发现由于仪器的调节气路系统被污染而造成的对载气的二次污染至使ECD基频大幅度增加使信燥比减小。 FPD和NPD等常用检测器,由于他们属于选择性检测器,操做时要根据分析要求,特别注意被测敏感物质中杂质的去除。 6)在做程序升温操作时,载气中的某些杂质,在低温时保留在色谱柱中,当拄温升高时不但引起基线漂移还可能在谱图上出现比较宽的"假峰"。 7)仪器影响 a.各类过滤器加速失效; b.调节阀(稳压阀,稳流阀,针形阀)被污染,气阻堵塞,调节精度降低或失灵; c.气路系统被污染,若要恢复仪器在高灵敏度情况下操做,有时要吹洗很长时间(可能一周以上)污染严重时有时再也无法恢复。 d.检测器的寿命,实践表明,对ECD和TCD的寿命影响最明显,应引起用户特别注意 一、衍生化分类: 1、柱前衍生:在分析物经过色谱柱前与衍生剂反应,反应产物在色谱柱上实现分离,实际分离的是衍生产物,检测的也是衍生产物。 2、柱后衍生:分析物在色谱柱中实现分离后,在衍生池内与衍生剂反应,检测的是衍生产物。 二、适用的化合物: 生物酸、生物碱、胺类、抗生素和氨基酸类等。 三、衍生化要求: 1、衍生剂必须过量且稳定。衍生剂不过量,反应不完全,检测不充分。衍生剂不稳定,重现性差。 2、衍生剂、衍生产物和衍生副产物容易分离。只能检测到衍生产物可以。 3、衍生反应快速、完全。 四、柱前衍生特点: 1、优点: (1)相对自由地选择反应条件。 (2)不存在反应动力学的限制。 (3)衍生副产物可进行预处理。 (4)容易允许多步反应的进行。 (5)有较多的衍生剂可选择。 (6)不需要复杂的仪器设备。 2、缺点: (1)形成的衍生副产物可能对色谱分离造成较大困难。 (2)在衍生化过程中,容易引入杂质,或损失样品。 五、柱后衍生特点: 1、优点: (1)重现性好,影响因素少,引入物质比较少。 (2)分析物可以在其原有的形式下进行分离,容易选用已有的分析方法。 2、缺点: (1)对于一定的溶剂和有限的反应时间来说,目前只有有限的反应可供选择。 (2)可能有扩散问题。 (3)需要额外的仪器设备。气体纯度低对色谱仪的不良影响
色谱仪的柱前衍生和柱后衍生