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高效液相色谱柱故障排除液相色谱解决方案

时间：2020-06-03 来源：仪多多仪器网作者：仪多多商城

高效液相色谱柱的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。

高效液相色谱柱故障排除

1、柱压过高

可能是微粒堵塞，柱床膨胀不可逆吸附，细菌生长等造成的。也有可能是系统反压问题，例如阻尼器堵塞，进样器堵塞，管路或连接口堵塞．在线过滤器不干净，压力传感器不准确等。

2、重复性差、不出峰、回收率低可能是色谱柱被污染，流动相pH值或者组成不合适造成固定相损失，样品溶剂不同或样品本身不稳定，固定相极性过强或者流动相极性过弱．或者发生非特异性吸附。也可能梯度实验时平衡时间不足，温度波动，流动相组成改变，样品溶剂不同，样品稳定性不好，方法的开发不好，缓冲液的酸碱度不合适或者缓冲能力不足。

3、柱效低

可能是色谱柱被污染、过滤片部分堵塞、色谱柱内的死体积造成，例如流动相pH值或者组成不合适造成固定相损失。流动相急剧变化造成固定相物理损坏，机械振动造成固定相产生裂缝，柱床收缩或干枯。也有可能是仪器连接的问题，认真检查进样器、检测器、管路、保护柱和在线过滤器等是否连接好，也可能是色谱柱没有平衡好，进样量过大等问题。

　　【仪器网使用手册】制备型液相色谱仪目的是对产品的单体进行提取和纯化，与蒸馏、萃取等纯化方法相比制备型液相色谱法更有效，但对操作的要求也更高。为保证制备型液相色谱仪可以达到理想的实验效果，需要谨慎选择操作条件，减少影响分离效果的因素。

　　色谱柱的选择

　　色谱柱的容量有一定限制，每种色谱柱都有自己的负载能力，因此样品的导入值上限需要根据所用的色谱柱确定。色谱柱与大样品量的关系如下：

　　1.色谱柱内半径越大，柱子的负载能力越高。

　　2.分配系数K增加，柱子的负载能力也会增加。同时，溶质的保留体积同样也会增加。

　　3.色谱柱的填充方法影响着填充密度，用良好方法填充的柱子密度趋近它的大值，柱子的样品量和分辨率同样也会趋近大值。

　　4.采用表面积大的吸附剂虽然会减弱色谱系统的速度和适用范围，但可以增加柱子的负载能力。

　　5.柱子的负载能力还随着柱子的长度增加而增长，但柱子过长会损失柱效。

　　6.填料颗粒的大小与柱子负载量也呈正相关关系。

　　样品的溶解

　　样品在溶剂里的溶解度会影响注入的大样品量。在流动相里难溶解的物质通常不能充分分离或分辨率比较低，因此需要先将样品溶解在另一种溶剂中，再将这种溶液送人色谱分离系统。中间溶剂的选择很重要，并且需要经验。

　　流动相的纯度