色谱柱是高效液相的心脏,在液相色谱仪的使用中,保持色谱柱的柱效、容量和渗透性,延长柱子的使用寿命是非常重要。色谱柱压力过高、过低都属于柱压问题。色谱柱压升高一般是由于柱床内产生了杂质,造成流体阻力加大所致。以下是专业技术人员总结的几个方面: 1、流动相的前处理:流动相或杨平中杂质堵塞色谱柱进口滤片,导致压力升高。这是由于流动相可能没有过滤,或过滤不彻底,使固体杂质滞留于滤板上所致。另一个方面也可能没有使用预保护柱所致。 2、样品的沉淀:当流动相与溶解样品的溶剂不一致时,样品进入色谱柱时,可能因溶解度降低而沉淀出来吸附于柱内,造成压力升高。 3、晶体的析出:使用含有缓冲液的流动相时,缓冲液中的无机盐可能会残留在体系之中,它们会因在新流动相中的溶解度降低而析出阻塞而压力升高。 4、细菌或霉菌孳生:流动相中、管路中或柱子进口处繁殖、生长霉菌堵塞滤板,导致压力升高。所以在使用磷酸盐缓冲液时一般要现配现用。 5、溶质吸附:一些溶质在色谱柱上有较强大的吸附力,洗脱时流动相也难以清除掉,累积的未洗脱溶质也会造成阻力增大从而造成压力升高。 6、流动相更换过度较快:当改变流动相体系时,不彻底的更换使不同性质、互不混溶的流动相存在于同一个体系之中,也会造成压力升高。 7、压力脉冲:运行过程中,有时会产生整个液相色谱仪系统内压力的突然升降。如泵压力变化,此所形成的压力脉冲会造成多孔填料的崩坏和柱床结构的微小变化,填料微屑的长期积累也可能会使柱床阻力增大,造成压力升高。 以上几种色谱仪柱压升高的原因,希望能给您一定的帮助。
一、衍生化分类: 1、柱前衍生:在分析物经过色谱柱前与衍生剂反应,反应产物在色谱柱上实现分离,实际分离的是衍生产物,检测的也是衍生产物。 2、柱后衍生:分析物在色谱柱中实现分离后,在衍生池内与衍生剂反应,检测的是衍生产物。 二、适用的化合物: 生物酸、生物碱、胺类、抗生素和氨基酸类等。 三、衍生化要求: 1、衍生剂必须过量且稳定。衍生剂不过量,反应不完全,检测不充分。衍生剂不稳定,重现性差。 2、衍生剂、衍生产物和衍生副产物容易分离。只能检测到衍生产物可以。 3、衍生反应快速、完全。 四、柱前衍生特点: 1、优点: (1)相对自由地选择反应条件。 (2)不存在反应动力学的限制。 (3)衍生副产物可进行预处理。 (4)容易允许多步反应的进行。 (5)有较多的衍生剂可选择。 (6)不需要复杂的仪器设备。 2、缺点: (1)形成的衍生副产物可能对色谱分离造成较大困难。 (2)在衍生化过程中,容易引入杂质,或损失样品。 五、柱后衍生特点: 1、优点: (1)重现性好,影响因素少,引入物质比较少。 (2)分析物可以在其原有的形式下进行分离,容易选用已有的分析方法。 2、缺点: (1)对于一定的溶剂和有限的反应时间来说,目前只有有限的反应可供选择。 (2)可能有扩散问题。 (3)需要额外的仪器设备。色谱仪的柱前衍生和柱后衍生