高效液相色谱法有“三高一广一快”的特点：
①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。
②高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到较佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。
③高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在µL数量级。
④应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。
⑤分析速度快、载液流速快：较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。
此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，但也有缺点，与气相色谱相比各有所长，相互补充。高效液相色谱的缺点是有“柱外效应”。在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。
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色谱分析是以假定给定组分的保留值在分离条件不变时保留值恒定为基础的。对标准的液相色谱程序而言，每个峰都对应于一个组分，以标准品与样品中组分的保留时间相对应进行鉴别。恒定的保留时间对分析设计排列的样品很重要。
在液相色谱仪分析中常涉及到组分的保留值。保留值发生改变可使已建立的方法不能继续进行下去，或引起分析周期太长，或者峰分不开。应该找出引起保留值变化的原因。
除上述条件之外，引起保留变化的原因主要包括下列3种：
1.柱-柱之间；
2.日-日或日内：保留时间可能随时间而变化，如温度、柱温、pH值等对柱性能有影响，通常是所有的峰提前或延迟。
3.样品-样品间：偶尔也有样品与标准品的保留时间不同，可能是样品介质的影响。
以下重点讨论造成日-日间和日内保留时间变化的影响因素，它们主要是：
a.分离条件控制差
除了色谱柱外，保留是温度、流动相组成和流速的综合体现，如果有一个条件变化，保留时间也会随之发生变化。
b.柱平衡慢
流动相组成或温度变化时，柱在新条件下再平衡需要一定的时间，在柱达到完全平衡钱不应进样。
c.柱钝化
长时间进样，柱会退化，强保留组分被柱不可逆的保留，导致所有组分保留减少。键合相层从填料微粒上剥落下来，会导致某些组分的保留增加，而另一组分的保留减少。
d.柱过载和样品介质相互作用
过大的样品量超出柱的线性范围，使保留减少。也可能是样品本身过载，从其它方面影响保留。
高效液相色谱仪是由储液器、泵、进样器、色谱柱、查看器、记录仪等几有些构成。储液器中的活动相被高压泵打入体系，样品溶液经进样器进入活动相，被活动相载入色谱柱（固定相、内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不一样的分配系数，在两相中作相对运动时，经过重复屡次的吸附-解吸的分配进程，各组分在移动速度上发生较大的不一样，被别离成单个组分顺次从柱内流出，经过查看器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱方式打印出来。 高效液相色谱仪常见故障解决方法： 故障1 活动相内有气泡，封闭泵，翻开泄压阀，翻开purge键，清洁脱气，气泡不断从过滤器冒出，进入活动相，不管翻开purge键几回，都无法清除不断发生的气泡。 因素过滤器长时刻沉浸于乙酸铵等缓冲液内，过滤器内部由于霉菌的成长繁衍，构成菌团，阻塞了过滤器，缓冲液难以流畅地经过过滤器，空气在泵的压力作用下经过滤器进入活动相。 处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，超声清洁几分钟即可；亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时，悄悄震荡几回，再将过滤器用纯水清洁几回，翻开泄压阀，翻开purge键，清洁脱气，如仍有气泡不断从过滤器冒出，持续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，如没有气泡不断从过滤器中冒出，阐明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸损坏，活动相能够流畅地经过过滤器。翻开泄压阀，翻开泵，流速调至1.0～3.0ml/min，纯水冲刷过滤器1小时摆布。即可将过滤器清洁洁净。封闭泄压阀，纯甲醇冲刷半小时即可。 故障2 柱压高因素：缓冲液盐分如（乙酸铵等）堆积于柱内；样品污染堆积。 处理关于第一种状况先用40～50℃的纯水,低速正向冲刷柱子，待柱压逐步降低后，相应进步流速冲刷，柱压大幅度降低后，用常温纯水冲刷，之后用纯甲醇冲刷柱子30分钟；关于第二种状况，由样品的堆积导致污染的C18柱，和纯水反向冲刷柱子，然后换成甲醇冲刷，接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲刷柱子（冲刷时刻的长短由样品污染的状况而定），再用换成甲醇冲刷，然后用纯水冲刷，最终甲醇冲刷正向冲刷柱子30分钟以上。 故障3 既无压力指示，又无液体流过[1>；。 泵密封垫圈磨损；很多气泡进入泵体。 处理关于第一种状况，替换密封垫圈；关于第二种状况，在泵作用的一起，用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处协助抽出空气。 故障4 压力动摇大，流量不稳定. 因素体系中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物，使得两者不能密封。 处理作业中留意调查活动相的量，确保不锈钢滤器沉入储液器瓶底，防止吸入空气，活动相要充沛脱气[2>；。如为单向阀和阀座之间夹有异物，拆下单向阀，放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洁. 故障5 出峰欠安，峰分叉。 因素色谱柱被污染；柱头填料陷落。 处理关于第一种状况，先用纯水反向冲刷柱子，然后换成甲醇冲刷，接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲刷柱子（冲刷时刻的长短由样品污染的状况而定），再换成甲醇冲刷，然后用纯水冲刷，最终甲醇冲刷正向冲刷柱子30分钟以上。如冲刷后仍然出峰欠安，则考虑第二种状况。关于第二种状况,拧开柱头，查看柱填料是不是硬结或陷落。去掉硬结有些(污染的填料），装入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用与柱内径一样的顶端滑润的不锈钢杆压紧，再填平，滴甲醇，再压紧重复几回，直至装满填平；。柱头用甲醇冲刷洁净，擦净柱外壁的填料，拧紧柱头，用纯甲醇冲刷30分钟以上。 下一篇：恒温水浴的操作使用及注意事项高效液相色谱仪常见故障解决方法
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