薄层色谱仪操作方法 色谱仪操作规程

一．压 力 异 常
操作压力的变化往往是故障的征兆。从下表中找出所观察到的现象，并在右侧的列表中参考相应的解决方法。
A、 没有压力显示，没有流动相流动
原 因 解决方法
1、电源问题 1、接通电源，开机
2、保险丝被烧坏 2、更换保险丝
3、控制器设定不正确或设定失败 3、a、采取恰当的设定 b、修理或更换控制器
4、柱塞杆折断 4、更换柱塞杆
5、泵头内有空气 5、溶剂脱气、启动泵抽出空气
6、流动相不足 6、a、补充流动相 b、更换入口滤头
7、单向阀损坏 7、更换单向阀
8、漏液 8、拧紧或更换手紧接头
B、 流动相流动正常，但没有压力显示
原 因 解决方法
1、仪表损坏 1、更换仪表
2、压力传感器损坏 2、更换压力传感器
C、 压力持续偏高
原 因 解决方法
1、流速设定过高 1、调整流速设定
2、柱前筛板堵塞 2、a、在允许情况下反冲色谱柱 b、更换筛板 c、更换色谱柱
3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀 3、a、使用恰当的流动相 b、冲洗色谱柱
4、色谱柱选择不当 4、选择恰当的色谱柱
5、进样阀损坏 5、清洗或更换进样阀
6、柱温过低 6、提高温度
7、控制器失常 7、修理或更换控制器
8、保护柱阻塞 8、清洗或更换保护柱
9、在线过滤器阻塞 9、清洗或更换在线过滤器
D、 压力持续偏低
原 因 解决方法
1、流速设定过低 1、调整流速
2、系统漏液 2、确定漏液位置并维修
3、色谱柱选择不当 3、选择恰当的色谱柱
4、柱温过高 4、降低温度
5、控制器失常 5、维修或更换控制器
E、 压力不断上升
原 因 解决方法
1、见列表C 1、见列表C
F、 压力降为零
原 因 解决方法
1、见列表A、B 1、见列表A、B
G、 压力不断下降，但不回零
原 因 解决方法
1、见列表D 1、见列表D
H、 压力波动
原 因 解决方法
1、泵中有气体 1、a、溶剂脱气 b、从泵中除去气体
2、单向阀损坏 2、更换单向阀
3、泵密封损坏 3、更换泵密封
4、脱气不充分 4、a、溶剂脱气 b、改变脱气方法（使用在线脱气法等）
5、系统漏液 5、确定漏液位置并维修
6、使用梯度洗脱 6、由于流动相粘度的变化引起的压力波动

二．漏液的问题通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题，就必须将接头取下，检查是否损坏（例如，卡套损坏、密封表面有杂质）；损坏的接头应该更换掉。A、 接头处漏液原 因 解决方法
1、接头松动 1、拧紧
2、接头磨损 2、更换
3、接头过紧 3、a、拧松，再重新拧紧 b、更换
4、接头被污染 4、a、拆下清洗 b、更换
5、部件不匹配 5、使用同一品牌的配件
B、 泵漏液原 因 解决方法
1、单向阀松动 1、a、拧紧单向阀（不必拧的过紧） b、更换单向阀
2、接头松动 2、拧紧接头（不必拧的过紧）
3、混合器密封损坏 3、a、更换混合器密封 b、更换混合器
4、泵密封损坏 4、维修或更换泵密封件
5、压力传感器损坏 5、维修或更换压力传感器
6、脉冲阻尼器损坏 6、更换脉冲阻尼器
7、比例阀损坏 7、a、检查隔膜，如果漏液立即更换 b、检查手紧接头，损坏的立即更换
8、放空阀的损坏 8、a、拧紧放空阀 b、更换放空阀
C、 进样阀漏液原 因 解决方法
1、转子密封损坏 1、重新安装或更换进样阀
2、定量环阻塞 2、更换定量环
3、进样口密封松动 3、调整
4、进样针头尺寸不合适 4、使用恰当的进样针
5、废液管中产生虹吸 5、保持废液管高于废液液面
6、废液管阻塞 6、更换或疏通废液管
D、 色谱柱漏液原 因 解决方法
1、尾端接头松动 1、拧紧接头
2、卡套内有填料 2、拆下、清洗卡套、重新安装
3、筛板厚度不合适 3、使用合适的筛板（参考下表）
筛板选择指导物质粒径 筛板孔径
3-4u 0.5u
5-20u 2u
E、 检测器漏液原 因 解决方法
1、流通池垫片损坏 1、a、避免过大的背景压力（压力降） b、更换垫片
2、流通池窗破碎 2、更换窗口
3、手紧接头漏液 3、拧紧或更换
4、废液管阻塞 4、更换废液管
5、流通池阻塞 5、重新安装或更换
三.谱图的各种问题
液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。
A、 峰拖尾
原 因 解决方法
1、筛板阻塞 1、a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱
2、色谱柱塌陷 2、填充色谱柱
3、干扰峰 3、a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱
4、流动相PH选择错误 4、调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰
5、样品与填料表面的溶化点发生反应图 5、a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂 b、更改色谱柱
B、 峰前延
原 因 解决方法
1、柱温低 1、升高柱温
2、样品溶剂选择不恰当 2、使用流动相作为样品溶剂
3、样品过载 3、降低样品含量
4、色谱柱损坏 4、见A1、A2
C、 峰分叉
原 因 解决方法
1、 保护柱或分析柱污染图 1、取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。
2、样品溶剂不溶于流动相 2、改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。
D、 峰变形
原 因 解决方法
1、样品过载 1、减少样品载量
E、 早出的峰变形
原 因 解决方法
1、样品溶剂选择不恰当 1、a、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂
F、 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
原 因 解决方法
1、柱外效应 1、a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路） b、使用小体积的流通池
G、 K’增加时，脱尾更严重
原 因 解决方法
1、二级保留效应，反相模式 1、a、加入三乙胺（或碱性样品） b、加入乙酸（或酸性样品） c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品） d、更换一支柱子
2、二级保留效应，正相模式 2、a、加入三乙胺（或碱性样品） b、加入乙酸（或酸性样品） c、加入水（或多官能团化合物） d、试用另一种方法
3、二级保留效应，离子对 3、加入三乙胺（或碱性样品）
H、 酸性或碱性化合物的峰拖尾
原 因 解决方法
1、缓冲不合适 1、a、使用浓度50-100mM的缓冲液 b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液
I、 额外的峰
原 因 解决方法
1、样品中有其他组份 1、正常
2、前一次进样的洗脱峰 2、a、增加运行时间或梯度斜率 b、提高流速
3、空位或鬼峰 3、a、检查流动相是否纯净 b、使用流动相作为样品溶剂 c、减少进样体积
J、 保留时间波动
原 因 解决方法
1、温控不当 1、调好柱温
2、流动相组分变化 2、防止变化（蒸发、反应等）
3、色谱柱没有平衡 3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱
K、 保留时间不断变化
原 因 解决方法
1、流速变化 1、重新设定流速
2、泵中有气泡 2、从泵中除去气泡
3、流动相选择不恰当 3、a、更换合适的流动相 b、选择合适的混合流动相
L、 基线漂移
原 因 解决方法
1、柱温波动。（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。） 1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图
2、流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。） 2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。
3、流通池被污染或有气体 3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用盐酸）
4、检测器出口阻塞。（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线） 4、取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。
5、流动相配比不当或流速变化 5、更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。
6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时 6、用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。
7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成 7、检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂
8、样品中有强保留的物质（高K’值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。 8、使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。
9、使用循环溶剂，但检测器未调整。 9、重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。
10、检测器没有设定在最大吸收波长处。 10、将波长调整至最大吸收波长处
M、 基线噪音（规则的）
原 因 解决方法
1、在流动相、检测器或泵中有空气 1、流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。
2、漏液图 2、见第三部分。检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。
3、流动相混合不完全 3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂
4、温度影响（柱温过高，检测器未加热） 4、减少差异或加上热交换器
5、在同一条线上有其他电子设备 5、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。
6、泵振动 6、在系统中加入脉冲阻尼器
N、 基线噪音（不规则的）
原 因 解决方法
1、 漏液图 1、见第三部分。检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液。
2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成 2、检查流动相的组成。
3、流动相各溶剂不相溶 3、选择互溶的流动相
4、检测器/记录仪电子元件的问题 4、断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。
5、系统内有气泡 5、用

色谱仪检定的特点
检定时间长
检定一台色谱仪一般需要3-5个小时，时间较长。色谱仪在运行前首先要进行1-2小时的预热，否则仪器的基线难以稳定。另外在在检定过程中，基线和重复性的检定也都需要较长的时间。
仪器型号繁多、操作复杂
色谱仪在运行前，需要更换色谱柱、流动相，启动泵和检测器，并对衰减、流速、纸速等进行设置，所以操作比较复杂。另外，色谱仪的型号比较多，各种型号色谱仪的操作界面都不尽相同，尤其是计算机工作站的引入，使得各种型号色谱仪的操作差别更大。
维修困难
色谱仪的内部电路非常复杂，而且零部件的更换必须使用相应厂家生产的配套产品，因而维修比较困难。标准物质是主要的计量装置 不论是气相色谱仪，还是液相色谱仪，基线噪声、基线漂移、最小检测浓度都是三个重要的指标，而对它们的检定只需使用标准物质即可进行
分布不均衡
色谱仪检定的方法
1、液相色谱仪
实验室液相色谱仪是由输液系统、进样器、色谱柱、检测器和数据记录处理装置等几部分组成的分析仪器。图3是典型的液相色谱仪组成方框图。它利用样品中各组分在色谱柱中固定相和流动相间分配系数或吸附系数的差异，将各组分分离后进行检测，并根据各组分的保留时间和响应值进行定性、定量分析。
主要检定项目：
泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差
检定输液系统
定性、定量重复性
最小检测浓度、基线噪声、基线漂移
关于最小检测浓度的检定，规程规定“在静态条件下，用注射器注入标准物质”然后用最小检测限公式计算，得出结论（所谓静态条件，即在不开泵的情况下，把样品直接注入样品池）。但由于近年来液相色谱仪结构设计有了较大的改变，尤其是计算机工作站的引入，使它的超作方式更为简化。因而，原来规程所规定的检测方法已不在适用。对于它的检定应在动态条件下（即正常的开机进样情况），注入20ΜL标准物质，然后用最小检测限公式进行计算。若仪器的进样筏小于20ΜL应把测得的峰高换算成20ΜL时的峰高（20ΜL/进样筏容量*所测峰高）。以上测量方法与即将出版的液相色谱仪新检定规程上的方法是相同的。
至于基线噪声和基线漂移按照规程所规定的条件对仪器进行设定后，使仪器空走半小时即可在色谱图中读出。单位AU是一个紫外吸收的单位，一般它与单位MV是相对应的，如果仪器色谱图上显示的单位是MV，可以通过查找仪器说明书找到换算关系。
检定原理：依据JJG705-90《实验室液相色谱仪计量检定规程》。
检定周期：两年
2、气相色谱仪
气相色谱仪是根据试样中各组分在气固或气液两相间的吸附或分配系数的不同随载气移动而进行分离的仪器。分离后的组分按保留时间的先后顺序进入检测器，并自动记录检测信号，依据组分的保留时间和响应值进行定性、定量分析。气相色谱仪由气源、气路控制系统、进样系统、色谱柱、检测器、电气系统、记录及处理系统组成。
主要检定项目：载气流速稳定性、柱箱温度稳定性、基线噪声、基线漂移、灵敏度、检测限
检定原理：依据JJG700-1999《气相色谱仪计量检定规程》。