高效液相色谱仪常见故障处理 液相色谱操作规程

【导读】故障1 流动相内有气泡，关闭泵，打开泄压阀，打开PURGE 键，清洗脱气 ,气泡不断的从过滤器冒出 , 进入流动相 , 无论打开PURGE 键几次，都无法清除不断产生的气泡.原因过滤器长期沉浸于乙酸 　　液相色谱仪是利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异，对混合物进行先分离，而后分析鉴定的仪器。
　　
　　现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。与经典液相柱色谱装置比较，具有、快速、灵敏等特点。一台品质优良的液相色谱系统应从以下几个方面考虑：
　　
　　一、主要技术指标优异：
　　
　　首先是如何看指标。液相色谱仪的指标很多，有泵的、检测器的、色谱柱等等。我们认为要看主要技术指标，根据国家标准，仪器的主要指标有噪音，漂移，zui小检测浓度，定性定量重复性等。这些指标都要放在系统，回路里去看，去比较。就是需要把各单元装置都要联接好，如接好色谱柱，进样阀，并且要通上流动相。因为您在分析中也都是联接好以后才可以进行分析的，而不是单单用个检测器或是泵的。
　　
　　然后在这个基础上，我们再去比较这些主要指标。
　　
　　1、噪音
　　
　　是指由仪器的电器元件、温度波动、电压的线性脉冲以及其他非溶质作用产生的高频噪声和基线的无规则波动。噪音的大小直接关系到仪器的检测灵敏度，噪音越大，检测的灵敏度就越低。对于检测低含量的样品就要求仪器的噪音越小越好，否则噪音过大将会导致基线不稳，甚至影响分析结果。
　　
　　2、zui小检测浓度（zui小检测限）
　　
　　是反映仪器灵敏度的重要参数。CL=2×Nd×C/H（CL ：zui小检测浓度 Nd:噪音 C：样品浓度zui小检测浓度 H：样品峰高）由上式可见，zui小检测浓度是和噪音成正比的，噪音越大，zui小检测浓度就越大，灵敏度就越低。某些厂家回避了这个指标，说明他们不愿在zui小检测浓度的基础上去比较噪音。
　　
　　3、漂移
　　
　　是指仪器稳定后一段时间内基线漂离原点的距离，通常用来衡量仪器稳定快慢。高品质的仪器能在较短的时间内达到稳定，从而在一定程度上提高了分析效率。
　　
　　4、定性定量重复性
　　
　　主要是考核仪器稳定性的指标，这对于分析样品来说是非常重要的。好的仪器其稳定性应该是十分的，这就要求多次进样保留时间及含量的一致性，这样做出来的结果才能使人信服。
　　
　　有的朋友会认为这些指标好像都是检测器的。对的，但是就前面所说条件是要放在整个回路和系统里去看去比较。例如：泵的脉动会直接影响噪音指标，泵的流量准确度、度指标，以及密封性不好也会影响相关指标。所以要系统地看指标。例如：某些公司在公布的指标中，噪音和漂移指标写的条件是空池或有的干脆不写。这个指标只考核了UV检测器光学和电气的特性，与实际情况相差甚远，并没有考验泵的压力脉动，液流回路的阻尼和UV检测器流通池的性能。所以我们认为从以上的主要指标中可以反应出仪器的一些真实水平。
　　
　　二、操作方便：
　　
　　操作方便性无论是对新手还是成熟的用户都是很重要的。操作越简单，有利于提高分析效率，也为以后分析方法的拓展提供有力的帮助。上海伍丰科学仪器有限公司的工作站软件实现了真正的智能化操作。它摒弃了以往工作站软件只能起到数据处理的理念，在国内推出了集控制与后处理于一身的软件，在操作使用上给用户带来了极大的方便。
　　
　　三、系统的，整体开发
　　
　　这里指的是仪器的整体开发，是一个完整的系统。目前市场上有这个现象，说我的泵是进口的，或者是检测器怎么好，用了什么很多的进口件组装等等。其实这是个误区。液相色谱是个复杂的系统，不是整体开发的，各项指标之间、软件和硬件、硬件和硬件等都不匹配，整体水平不会高到哪里去，而且在售后服务方面对用户也是不负责任的。
　　
　　整体开发的主要优点有：各项技术指标统一、仪器各单元的通信协调、能够建立一个整体的数字化评价系统、体现了企业的科技及开发实力。
　　
　　国外知名的仪器生产厂家的产品也是整体开发的，所以能够保证仪器的整体水平。
　　
　　四、稳定可靠，故障率低
　　
　　1、色谱柱的使用说明：
　　
　　(1)色谱柱使用前注意事项：
　　
　　色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。
　　
　　(2)流动相：
　　
　　流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。 以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDS C18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0-10.0。当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
　　
　　(3)样品：
　　
　　样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱(SPE)对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。
　　
　　2、色谱柱的保存
　　
　　(1)反相色谱柱每天实验后的保养：
　　
　　使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
　　
　　(2)长期保存色谱柱：
　　
　　如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水(含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度是室温。
　　
　　3、色谱柱的再生
　　
　　因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
　　
　　(1)反相柱的再生：依次采用20-30倍的色谱柱体积的甲醇：水=10：90 (V/V)，乙腈，异丙醇作为流动相冲洗色谱柱，完成后再以相反顺序冲洗色谱柱。
　　
　　(2)正相柱的再生：依次以20-30倍色谱柱的体积的正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇作为流动相冲洗色谱柱，然后再以相反的顺序冲洗色谱柱。要注意上述溶剂必须严格脱水。
　　
　　4、色谱柱在使用过程中易出现的问题和解决办法
　　
　　色谱柱在使用中zui常见的问题就是柱压升高，如果柱压是在长时间使用过程中缓慢增加，属于正常现象。但柱压在使用过程中突然升高(系统管路堵塞及压力传感器故障除外)，可能的原因有如下几点：
　　
　　(1)色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染；
　　
　　(2)色谱柱头的填料被样品污染；
　　
　　(3)色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂，形成结晶析出； (4)流动相PH值过大或过小使固定相结构破坏或溶解。
　　
　　解决办法如下：
　　
　　(1)如确定是色谱柱头的过滤筛板被污染，可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力，或者卸下色谱柱头，将其放在10％的稀硝酸内超声清洗10分钟，后再用纯水超声10分钟，重新装入色谱柱。
　　
　　(2)如确定色谱柱头的填料被污染，将柱头螺丝卸下，挖出柱内前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔细修复后，重新安装上柱头螺丝。
　　
　　(3)如确定定是盐结晶，用10%的甲醇/水冲洗色谱柱使柱内盐全部溶解，再换高浓度甲醇。
　　
　　(4)如果因PH值使用不当，很难恢复。