一、取镜和安放
1.右手握住镜臂,左手托住镜座。
2.把显微镜放在实验台上,略偏左(显微镜放在距实验台边缘7厘米左右处)。安装好目镜和物镜。
二、对光
3.转动转换器,使低倍物镜对准通光孔(物镜的前端与载物台要保持2厘米的距离)。
4.把一个较大的光圈对准通光孔。左眼注视目镜内(右眼睁开,便于以后同时画图)。转动反光镜,使光线通过通光孔反射到镜筒内。通过目镜,可以看到白亮的视野。
三、观察
5.把所要观察的玻片标本(也可以用印有“6”字的薄纸片制成)放在载物台上,用压片夹压住,标本要正对通光孔的中心。
6.转动粗准焦螺旋,使镜筒缓缓下降,直到物镜接近玻片标本为止(眼睛看着物镜,以免物镜碰到玻片标本)。
7.左眼向目镜内看,同时反方向转动粗准焦螺旋,使镜筒缓缓上升,直到看清物像为止。再略微转动细准焦螺旋,使看到的物像更加清晰。
8.高倍物镜的使用:使用高倍物镜之前,必须先用低倍物镜找到观察的物象,并调到视野的正中央,然后转动转换器再换高倍镜。换用高倍镜后,视野内亮度变暗,因此一般选用较大的光圈并使用反光镜的凹面,然后调节细准焦螺旋。观看的物体数目变少,但是体积变大。
四、整理
8.实验完毕,把显微镜的外表擦拭干净。转动转换器,把两个物镜偏到两旁,并将镜筒缓缓下降到最低处,反光镜竖直放置。最后把显微镜放进镜箱里,送回原处。
《注意事项》:
1、严忌单手提取显微镜。
2、若须移动显微镜,务必将显微镜提起再放至适当位置,严忌推动显微镜(推动时造成的震动可能会导致显微镜内部零件的松动,切记!!),使用显微镜请务必小心轻放。
3、使用显微镜时坐椅的高度应适当,观察时更应习惯两眼同时观察,且光圈及光源亮度皆应适当,否则长时间观察时极易感觉疲劳。
4、转动旋转盘时务必将载物台降至最低点,以免因操作不当而刮伤接目镜之镜头。
5、标本染色或其它任何操作皆应将玻片取下,操作完成后再放回载物台观察,切勿在载物台上操作,以免染剂或其它液体流入显微镜内部或伤及镜头。
6、观察完一种材料,欲更换另一种材料时,务必将载物台下降至最低点,换好玻片后再依标准程序重新对焦,切勿直接抽换标本,以免刮伤镜头或玻片标本。
7、用毕显微镜应将载物台下降至最低点,并将低倍镜对准载物台中央圆孔处,将电源线卷好,盖上防尘罩,并收入存放柜中。
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荧光显微镜滤色片的选用
滤色片是荧光显微镜的关键部件, 在荧光显微镜中按其功能可分为激发滤色片和截止滤色片两类。激发滤色片的功能是从光源中分析出所需的特定光谱, 以激发标本产生荧光。截止滤色片的功能是仅把标本上发出的荧光透过成像, 而将其它光阻挡不参与成像, 一般激发滤色片安置在紧靠光源, 而截止滤色片在物镜与目镜之间。
按其透过光谱特性曲线可分为“短波通过”、“长波通过”和“波段通过”滤色片。波段通过滤色片按波带宽度又可分为“宽波带”和“窄波带”滤色片, 如果半宽带(即HW = 50% 的透射峰的主透射带的宽度之半)大于50nm , 视为“宽波带型”; 若小于20nm , 则可视为“窄波带型”。
滤色片初期用贮放玻璃盒中的有色液体, 后改用带色胶质片, 由于易变色和使用不方便已被淘汰。现在经常使用的为色玻璃和干涉滤色片, 色玻璃大都属宽波带滤色片, 透过波段宽, 透过率随厚度而降低, 价格相对低廉。由于色玻璃与空气的界面上, 约有4% 光线被反射掉, 玻片愈多, 光能损失愈大, 限制了它的使用性能。干涉滤色片的出现, 可按需要制成能透过或截止一定波段的滤色片, 从而促使荧光显微术的进展, 现代技术上已能对某波段的透射率或反射率进行控制。
由此可见, 多数荧光色素和荧光发色团分子具有相当宽的吸收光波带和荧光波带, 峰值间隔又较大, 所以在需要得到强荧光时, 很少使用窄波带滤色片, 因为它致使相当大的光源能量损失了(没有利用) ,仅在光源的强发射谱线和激发时的吸收峰相重合时才使用。当使用宽波带滤色片时, 往往组织成分和光路中的自发荧光会被这类滤色片中的短波光激发出来, 加到荧光图象中而混扰。多数应用中, 激发滤色片的半宽约20nm 就能给出满意的结果。
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