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制备型液相色谱仪的使用步骤 液相色谱常见问题解决方法

时间:2020-06-29    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     
【导读】制备型液相色谱仪广泛应用于多个多个生产研究领域,下面我面介绍下它的使用的基本步骤。一、开机1、接通电脑和仪器电源(接通电源之前可先把吸头拿到要使用的流动



    制备型液相色谱仪广泛应用于多个多个生产研究领域,下面我面介绍下它的使用的基本步骤。

    一、开机

    1、接通电脑和仪器电源(接通电源之前可先把吸头拿到要使用的流动相瓶中)

    2、开仪器电源开关,一般先上后下,下为检测器开关。

    3、检查流动相是否够,仪器上记录的溶剂量时候正确。

    4、开电脑

    5、打开仪器联机软件进入界面,点击启动设置泵流速为10,此时仪器中应该有液体流出

    6、点击平衡然后点击每个波长和调整

    冲一段时间,待压力稳定后可以进样

    二、进样

    1、将进样器扭到load朝上,吸取一定量待分离液,快速注入,做过的是吸取0.2毫升。

    2、点击控制界面菜单栏中“运行控制”按钮—样品信息—设置信息存储路径(每次都要做)

    3、扭动进样器,使处于inload状态,保留时间开始计时

    4、接峰

    5、所有峰出来后,点击菜单栏中的中断—中断,准备重复进样

    三、关机

    1、点击中断后冲几分钟,将流速设为0,待压力为0后将吸头转移到甲醇中,并把流速设为10

    2、冲到已经没有东西被冲下为止,一般需要半个小时。一般此时压力早已稳定。

    3、将流速设为0,点击界面上的关闭(在启动旁边)

    4、关闭窗口,弹出的窗口都点肯定的,如确定是等

    7、关闭仪器和电脑

    6、关闭插板

    掌握这些制备型液相色谱仪的使用步骤,可以让我们在使用中更加的安全快捷。





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    液相色谱仪是一种常用的分析仪器,主要由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成,被广泛用于生物医学、环境化学、石油化工等领域中。
    1、柱压高原因
    (1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内;
    (2)样品污染沉积。处理对于第一种情况先用40~50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。
    2、气泡溢出
    流动相内有气泡,关闭泵,打开泄压阀,打开purg键,清洗脱气,气泡不断从过滤器冒出,进入流动相,无论打开purge键几次,都无法清除不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小时,轻轻震荡几次,再将过滤器用纯水清洗几次,打开泄压阀,打开purge键清洗脱气,如仍有气泡不断从过滤器冒出,继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏,流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀,打开泵,流速调至1.0~3.0ml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀,纯甲醇冲洗半小时即可。
    3、既无压力指示,又无液体流过
    (1)泵密封垫圈磨损;
    (2)大量气泡进入泵体。处理对于第一种情况,更换密封垫圈;对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。
    4、压力波动大,流量不稳定
    原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。
    5、出峰不佳,峰分叉
    (1)色谱柱被污染;
    (2)柱头填料塌陷。处理对于第一种情况,先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳,则考虑第二种情况。对于第二种情况,拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料),装入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧反复几次,直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净,擦净柱外壁的填料,拧紧柱头,用纯甲醇冲洗30分钟以上。





高效液相色谱仪常用脱气方法

  高效液相色谱仪(HPLC)现已成为有机化学分析的重要手段之一。同样,在食品分析中,无论是残留分析还是成分分析,HPLC也已成为不可或缺的分析仪器。和其它分析仪器一样,你若想让HPLC很好地为你工作、得到可靠的数据,首先你要保养好它,使它处于一个良好的待机状态,这样你操作它进行分析时就可以比较顺利地获得理想的结果。  流动相脱气对于避免HPLC系统出问题,顺利得到一个理想的数据是一个很有效的措施。HPLC系统内是不能够有气泡存在的。HPLC泵在输送液体时要产生很大的压力,由于气体的压缩比与液体相比大的多,因而当气泡存在时,你将观察到瞬间的流速降低和系统压力下降。如果这个气泡足够大,液相泵将不能输送任何溶剂,而且如果压力低于预先设定的压力低限,泵将停止工作。有些泵设计可以很好地排除气泡,而也有一些泵设计当气泡存在时将停止运转。  常用的脱气方法有如下几种:  1、吹氦脱气法。  利用氦气在液体中溶解度比空气低的特性,在0.1MPa压力下,以约60 mL/min流速通入流动相储液容器中10~15min,可以很有效地从流动相中排除溶解的空气,能排除接近80%的氧气。采用一个高效分布式喷射流装置,一体积的氦气可从流动相中将等体积的几乎全部气体排除。这意味着1L氦气通过1L流动相就可完成排气这个工作。这种脱气方法虽然好,但我们国内氦气价格较高,很少有实验室采用此方法。  2、加热回流法。  此法的脱气效果较好。在操作时要注意冷凝塔的冷却效率,否则溶剂会丢失,混合流动相的比例会有变化。  3、抽真空脱气法。  此法可使用真空泵,降压至0.05~0.07MPa即可除去溶解的气体。但是由于真空脱气会使混合溶剂组成发生变化,从而影响到实验的重现性,因此多用于单溶剂体系的简单分析。  4、超声波脱气法。  将欲脱气的流动相置于超声波清洗器中,用超声波震荡10~20min。此法的脱气效果最差。  5、在线脱气法。  现在商品的HPLC仪器,均可配在线脱气机。在线脱气使用简单,低故障,有效。建议购买仪器时一定要购买,有的公司是作为选购件,所以与仪器公司谈配置时应与公司确认。

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