分光光度计属于精密仪器,应当妥善保管和精心维护,这样才能保证分光光度计长期使用、长期的稳定可靠、测量精度高。
分光光度计使用注意事项
1. 使用仪器前,使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理,以及各个操纵旋钮之功能。在未按通电源之前,应该对仪器的安全性能进行检查。
2. 指针式仪器尚未接通电源时,电表指针必须位于零刻度上,若不是这种情况,则可以用电表上的校正螺丝进行调零。
3. 仪器在制造厂原包装条件下,应储存在环境温度为5℃~35℃,湿度不超过85%的室内,且在空气中不应有足以引起腐蚀的有害物质。
4. 仪器工作环境应在在干燥的房间内,使用时放置在坚固平稳的工作台上,室内照明不宜太强。
5. 比色皿使用完毕后,请立即用蒸馏水冲洗干净,并用干净柔软的纱布将水迹擦去,以防止表面光洁度被破坏,影响比色皿的透光率。
6. 比色杯的配套性问题。比色杯必须配套使用,否则将使测试结果失去意义。
7. 鉴于仪器在出厂之前已经调试到较佳状态,所以用户不能擅自调整,更不能擅自打开机壳拆卸其中的零件(更换光源灯除外),尤其是拆卸单色器、不能碰伤或擦拭光学原件镜面。
8. 如有故障急需自修,应在厂方技术人员同意指导下,请具有相应资质的专业人员进行检查、调整和维修,建议返修。
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与传统分光光度计相比,超微量分光光度计要求的样品体积小,不需要比色皿,比色杯清洗方便,只需用干净的吸水纸将样品从检测平台上擦拭干净即可。除此之外,实验过程也更为简单,不需预热,可随时检测,检测结果显示吸光度值的同时,程序直接给出浓度值。超微量分光光度计与传统相比,体积更小,更方便使用。
实验室如何选择一款性价比高、质量可靠的超微量分光光度计,下面几项指标可以作为参考:
1、使用要求和预算:固定波长的价值量较低几万块钱,可以做全波长扫描的价值量高,一般在6万以上。如果仅要求可以测核酸、蛋白,可以选择固定波长的。
2、检测浓度范围:根据日常提取样品的浓度,范围大的会检测到15000ng/ul,范围小的会在3000ng/ul。
3、光源:LED光源或者氙灯光源,
4、品牌:进口或者国产。国产品牌的价位一般在3-5万,进口品牌的价位一般在4-10万。对产品品牌要求高的,预算比较充足的用户,可以考虑购买进口品牌的;国产品牌的性价比高,技术水平也能达到国外的先进水平。
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【紫外可见分光光度计工作原理】
分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后,发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构,其吸收光能量的情况也就不会相同,因此,每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线,可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量,这就是分光光度定性和定量分析的基础。
分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。它是带状光谱,反映了分子中某些基团的信息。可以用标准光图谱再结合其它手段进行定性分析。
根据Lambert-Beer定律说明光的吸收与吸收层厚度成正比,比耳定律说明光的吸收与溶液浓度成正比;如果同时考虑吸收层厚度和溶液浓度对光吸收率的影响,即得朗伯-比耳定律。即A=εbc,(A为吸光度,ε为摩尔吸光系数,b为液池厚度,c为溶液浓度)就可以对溶液进行定量分析。
将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中,在同一条件下分别测定紫外可见吸收光谱。若两者是同一物质,则两者的光谱图应完全一致。如果没有标样,也可以和现成的标准谱图对照进行比较。这种方法要求仪器准确,精密度高,且测定条件要相同。
实验证明,不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同,这可以利用紫外光谱来判断化合物在不同溶剂中氢键强度,以确定选择哪一种溶剂。
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