在光谱学应用中，获得单波长辐射是不可缺少的手段。除了用单色光源、颜色玻璃和干涉滤光片外，大都使用扫描选择波长的单色仪。尤其是当前更多地应用扫描光栅单色仪，在连续的宽波长范围选出窄光谱辐射。
当一束复合光线进入光谱仪的入射狭缝，首先由光学准直镜准直成平行光，再通过衍射光栅色散为分开的波长。
利用不同波长离开光栅的角度不同，由聚焦反射镜再成像于出射狭缝。通过电脑控制可精确地改变出射波长。
1.光源不同：
可见分光光度计的光源一般只用钨灯，而紫外可见分光光度计是用钨灯和氘灯俩个电源，同时还多了这俩个光源灯的切换部件。这是因为钨灯的光谱范围主要在可见到近红外这段，氘灯主要在紫外端，也正是因为光源的不一样，紫外可见分光光度计也多了一个专门提供氘灯工作的氘灯电源了。
2.光学器件的不同：
由于玻璃能吸收紫外波，而对可见到近红外端有比较好的透过性，所以可见分光光度计的一些光学部件可以使用玻璃，而紫外可见分光光度计就不能使用玻璃部件，一般使用适应光学部件。同时由于这个原因，在比色皿的选择上也就有不同了，可见分光光度计可以使用玻璃制的比色皿，而紫外可见分光光度计一般使用石英制的比色皿了。
分光光度计计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
分光光度计的基本工作原理
分光光度计的基本工作原理是基于物质对光（对光的波长）的吸收具有选择性，不同的物质都有各自的吸收光带，所以，当光色散后的光谱通过某一溶液时，其中某些波长的光线就会被溶液吸收。在一定的波长下，溶液中物质的浓度与光能量减弱的程度有一定的比例关系，即符合比尔定律。
T=I/Iolg（Io/I）=εcb
式中，T为透过率，Io为入射光强度，I为透射光强度，A为消光值（吸光度），ε为吸收系数，b为溶液的光径长度，c为溶液的浓度。从以上公式可以看出，当入射光、吸收系数和溶液厚度一定时，透光率是根据溶液的浓度而变化的。
在使用分光光度计时，我们必须要注意一些使用后的维护，保养，和一些基本使用注意事项，才能达到更好的使用效果。
分光光度计的使用维护：
1、使用的吸收池必须洁净，并注意配对使用。量瓶、移液吸管均应校正、洗净后使用。
2、取吸收池时，手指应拿毛玻璃面的两侧，装盛样品以池体的4/5为度，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无溶剂残留。吸收池放入样品室时应注意方向相同。用后用溶剂或水冲洗干净，晾干防尘保存。
3、供试品溶液浓度除各该品种已有注明外，其吸收度以在0.3～0.7之间为宜。
4、测定时除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm石英吸收池，在规定的吸收峰±2nm以内，测几个点的吸收度或由仪器在规定的波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸收度最大的波长作为测定波长，除另有规定外吸收度最大波长应在该品种项下规定的测定波长±2nm以内。
5、供试品应取2份，如为对照品比较法，对照品一般也应取2份。平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。
6、选用仪器的狭缝宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度值会偏低，狭缝宽度的选择应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，对于大部分被测品种，可以使用2nm缝宽。
7、单色器是仪器的核心部分,装在密封盒内不能拆开,为防止色散元件受潮发霉,必须经常更换单色器盒干燥剂。
8、光电转换元件不能长时间曝光,应避免强光照射或受潮积尘。
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