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半制备型液相色谱仪的优点及技术参数 液相色谱常见问题解决方法

时间:2020-06-30    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     
【导读】制备液相色谱技术越来越广泛地应用于制药,化工和生物工程等领域中样品的分离和纯化。 典型的应用如合成原料的纯化,标准物质的制备,最终产品的提纯等方面。 P系列制备泵设计合理,运行平稳,性能指标较高,辅

制备液相色谱技术越来越广泛地应用于制药,化工和生物工程等领域中样品的分离和纯化。 典型的应用如合成原料的纯化,标准物质的制备,最终产品的提纯等方面。 P系列制备泵设计合理,运行平稳,性能指标较高,辅以UV系列紫外-可见波长检测器(配半制备/制备型检测池)及美国Rheodyne公司手动/电动进样阀及切换阀,即可满足广大用户生产和研究的需要。
  
P230P
高压恒流泵 
主要优点 
双泵头,串联式结构-流量准确; 
卡口式泵头构造,使泵头的装卸极为容易,便于维护保养和更换部件; 
浮动柱塞设计,使泵具有最小脉动,极大地延长密封圈的使用寿命; 
提供计算机控制口,可组合晋级为高压液相系统; 
操作简单易用。 
  
基本参数 
流量范围 0.01-40.00(ml/min)0.1ml/min步长调节流量 
流量精确度 优于 ±0.5%RSD 
流量准确度 优于 ±5.0% 
最高工作压力 40.0MPa 
安全控制 压力上限可设定 
显示方式 LED数字 
显示模式 实际压力、压力上限设定、流量设定 
功耗 40W 
电源 220Vv±22V,50Hz±0.5Hz 
外型尺寸 400mm×280mm×150mm 
重量 20Kg 

紫外可见可变波长检测器 
主要优点 
先进的全息凹面光栅的单色仪结构,使本仪具有较高的灵敏度; 
双光路光学系统,最大程度地减少噪声和漂移,允许工作至0.005AUFS 
无须更换光源检测波长范围可拓宽至可见光谱范围; 
采用面板触摸开关,不须繁琐的功能调整,自动归零; 
镶嵌式检测池及氘灯设计,使维护和更换更加方便。 

基本参数 
波长范围 190nm-600nm 
波长精确度 ±1.0nm 
波长准确度 ±2.0nm 
谱带宽度 6nm 
吸收范围 0.005-2.56AUFS(10
基线噪声 ≤±5.0×10-5 AU(254nm) 
基线漂移 ≤±5.0×10-4AU/hr 
最小检测量 4×10-8g/mL(萘的甲醇溶液
光源 氘灯 
显示方式 LED数字 
显示模式 吸收值、测量信号、参比信号 
功耗 40W 
电源 220Vv±22V,50Hz±0.5Hz 
外型尺寸 400mm×280mm×150mm 
重量 20Kg 

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  保留时间是指溶质通过色谱柱所需时间,即待测组分从进样到出现峰大值所需的时间。保留时间是由色谱过程中的热力学因素所决定,在一定的色谱操作条件下,任何一种物质都有一确定的保留时间,有着类似于比移值相同的作用,可作为色谱定性分析的依据。换言之,如果保留时间出现漂移问题,那么检测结果也会随之受到影响。
 
  保留时间重现是液相性能好坏的一个重要标志,同一种东西,两次的保留时间相差不要超过15s,超过了半分钟可看做保留时间漂移,就无法进行定性。这里小编就列举几个保留时间漂移的的原因和解决方法。
 
  1色谱柱平衡
 
  如果观察到保留时间漂移,首先应考虑色谱柱是否已经平衡。在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。通常平衡需要10~20个柱体积的流动相,但如果在流动相中加入少量添加剂(如离子对试剂)则需要相当长的时间来平衡色谱柱。流动相污染也可能是原因之一。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上,从而造成保留时间的漂移。应注意:水是很容易污染的流动相成分。
 
  2固定相稳定性
 
  固定相的稳定性都是有限的,即使在推荐的pH范围内使用,固定相也会慢慢水解。例如,硅胶基质在pH4时水解稳定性好,水解速度与流动相类型和配体有关。双官能团配体和三官能团配体比单官能团配体的键合相要稳定;长链键合相比短链键合相稳定;烷基键合相比氰基键合相稳定的多。经常清洗色谱柱亦会加速色谱柱固定相的水解。其他硅胶基质键合相在水溶液环境中也可以发生水解,如氨基键合相等。
 
  3色谱柱污染
 
  保留时间漂移的另一个常见原因是色谱柱污染。HPLC色谱柱是非常有效的吸附性过滤器,它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。污染源可以是:流动相本身,流动相容器,连接管、泵、进样器和仪器密封垫,以及样品等。通常通过实验可判断污染的来源。样品中如果存在色谱柱上保留很强的组分,就可能是使保留时间漂移的潜在根源。这些根源通常是样品基质,如:配药中的赋形剂,生化样品(如血清)中的蛋白及类脂类化合物,食品样品中的淀粉,环境水样中的腐殖酸等。通常样品中的强保留组分具有较高的分子量,在此情况下,保留时间漂移的同时或其后会有反压的增加,可以通过使用固相提取( SPE)等样品前处理方法来去除样品基质的影响,避免色谱柱污染简单的方法是防患于未然。相比之下,找到问题的所在并设计有效的清洗步骤以去除污染物要困难的多。通常使用在给定色谱条件下的强溶剂,但并非所有污染物都可以在流动相中溶解。如THF可去除反相色谱柱中的许多污染物,但蛋白在THF中就不能溶解, DMSO常常用于去除反相色谱柱中的蛋白。使用保护柱是个非常有效的方法。反冲色谱柱仅是不得已时采用的办法。
 
  4流动相组成
 
  流动相组成的缓慢变化也是保留时间漂移的常见原因。如流动相中易挥发组分的挥发及循环使用流动相等,应防止流动相由于蒸发、反应等等原因造成的变化。
 

1. 色谱柱中的流动相会排干吗?

不少做色谱分离试验的人遇到过这样的情形:不慎未及时补充流动相,泵将溶剂瓶中的流动相吸干了,HPLC系统由此而停止工作了。如此情况是否会损坏色谱柱?泵是否已将色谱柱中所有流动相都排干了?色谱柱还能使用吗?事实上,如果泵将溶剂瓶中的流动相吸干,并不会造成色谱柱的损坏。即使泵中充满了空气,泵也不会将空气排入色谱柱。因为泵只能输送液体,而不能输送空气。相比之下,另一个更可能发生的情况是忘记盖上色谱柱两端的密封盖或盖子太松而使色谱柱变干。同样,整个色谱柱干涸的情况不太容易发生,多半可能只是色谱柱两端的几个毫米变干了,因挥发掉所有溶剂是色谱柱变干需要相当长的时间。即使色谱柱真的变干了,也不一定就不可救药了。可以尝试用一种完全脱气的、表面张力低的溶剂(如经氦气脱气的甲醇)冲洗色谱柱以除去气体。较低的表面张力有助于浸润填料表面;已脱气的溶剂应该能够溶解并去除滞留在填料中的气体。色谱柱大约需要(以1mL/min的流速)冲一个小时或更多的时间被彻底浸润,恢复到正常状态。
 
2. 使用PEEK(polyetheretherketone)管路和接头需要注意什么问题?

如果经常需要改变流路或更换不同品牌的色谱柱,使用PEEK材料制成的管路和接头会非常方便。PEEK管路容易连接;PEEK接头不仅无需工具,手拧即可固定,而且容易调节锥箍之外的管路长度,方便与不同品牌或规格的色谱柱相连接。

使用此类材料的管路需要注意的是:PEEK对卤代烷烃和四氢呋喃的兼容性不好。虽然未观察到上述溶剂溶解PEEK材料的明显迹象,但PEEK遇到上述溶剂会变脆。另一个西药考虑的因素是压力限。不锈钢管可耐受6000psi的压力,但PEEK管只能耐受近4000psi(但多数HPLC应用系统压力不会超过3000psi)。

使用PEEK接头时则无需担心接头耐溶剂性能,因为接头几乎或很少与溶剂直接接触。但手拧固定的PEEK接头压力限低于不锈钢管,因而压力太高时,可能会使接头在管路上滑动而产生死体积或漏液。
 
3. 如何预防液相泵的故障:

要保持泵的良好操作性能,必须维护系统的清洁,保证溶剂和试剂的质量,对流动相进行过滤和脱气.下面列出预防泵故障的几项措施:

1)、用高质量试剂和HPLC级溶剂;

 2)、过滤流动相和溶剂;

 3)、脱气;

4)、每天开始使用时放空排气,工作结束后从泵中洗去缓冲液;

5)、不让水或腐蚀性溶剂滞留泵中;

 6)、定期更换垫圈;

7)、需要时加润滑油;

8)、查阅有关泵操作手册中的其它建议。

处于良好操作状态的泵,应该能使色谱图上的基线平稳;保留时间的重复性好。在等度洗脱时压力波动小于2%。梯度洗脱时压力变化应是缓慢和平稳的。
 
为了使故障发生后尽快排除,平时应常备密封、单向阀(入口与出口)、泵头装置、各式接头、保险丝等部件,以及更换工具。


 



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