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液相色谱中常用的柱前衍生化方法 液相色谱技术指标

时间:2020-06-30    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     
【导读】液相色谱使用较多的是紫外检测器,为了使一些没有紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物能被紫外检测器检测,往往通过衍生化反应在这些化合物的分子中引入有强紫外吸收的



    液相色谱使用较多的是紫外检测器,为了使一些没有紫外吸收或紫外吸收很弱的化合物能被紫外检测器检测,往往通过衍生化反应在这些化合物的分子中引入有强紫外吸收的基团:2,4-二硝基苯、苯甲基、对硝基苯甲基、3,5-二硝基苯甲基、苯甲酸酯、对甲苯酰、对氯苯甲酸制、对硝基苯甲酸酯、对甲氧基苯甲酸酯、苯甲酰甲基、对溴苯甲酰甲基,这些衍生物可被紫外检测器检测。
    大多数紫外衍生反应来自经典的光度分析和有机定量分析,新的衍生化反应和衍生化试剂是随液相发展而发展的,这些反应的原理都来自有机合成,所以就要求操作者对有机合成有所了解。但是,由于柱前衍生化是为色谱分析准备样品,处理样品的量小(mg级),所用的小型和微型反应器皿又不同于常量的有机合成,而是类似于近年来发展的微量有机合成。紫外衍生化反应要选择反应产率高、重复性好的反应。过量试剂和试剂中的杂质如果干扰下一步的色谱分离和检测,则在色谱进样前要进行纯化分离。还要注意反应介质对紫外吸收的影响。
    (1)苯甲酰化反应:苯甲酰氯及其衍生物--对硝基苯甲酰氯、3,5-二甲基苯甲酰氯和对甲氧基苯甲酰氯都可以同胺、醇和酚类化合物反应,生成紫外吸收的苯甲酸酯类衍生物;
    (2)2,4-二硝基氟代苯(DNFB)的反应:DNFB与醇的反应产率很低,但可与大多数伯胺、仲胺和氨基酸反应,生成强紫外吸收的苯胺类衍生物;
    (3)苯基异硫氰酸酯(PITC)的反应:PITC可与氨基酸反应,生成苯基己丙酰硫脲衍生物--PTH氨基酸;
    (4)苯基磺酰氯的反应:苯基磺酰氯可与伯胺和仲胺反应。
    甲苯磺酰氯可与多氨基化合物反应,不仅能提高它们的检测灵敏度,还可改变HPLC的分离度。
    (5)有机酸的酯化反应:有机酸很容易与酰溴基反应生成酯,常用的酰溴基试剂有苯甲酰溴、甲氧基苯甲酰溴、对溴基苯甲酰溴和对硝基苯甲酰溴等;
    酯化反应在极性溶剂(如乙腈、丙酮或四氢呋喃)中进行,有时需要加催化剂,如冠醚加钾离子、二乙胺或N-二异丙基胺等。
    (6)羰羟基化合物的反应:醛类和酮类中的羰基可与2,4-二硝基苯肼(DNPA)反应,反应在弱酸性条件下进行,生成苯腙衍生物。
    羰基化合物还可以与对甲基苄基羟胺(PNBA)在碱催化下反应,生成有强紫外吸收的肟。





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高效液相色谱仪的脱气的必要性

  在食品分析中,无论是残留分析还是成分分析,HPLC 也已成为不可或缺的。流动相脱气是HPLC 系统能得到可靠数据的一个很有效的措施。下面分析一下,高效液相色谱脱气的必要性,并总结归纳了脱气常用的方法。

  一、脱气的必要性

  流动相脱气是HPLC 系统能得到可靠数据的一个很有效的措施。HPLC 泵在输送液体时要产生很大的力量,由于气体的压缩比与液体相比大的多,因而当气泡存在时,我们发现瞬间的流速降低和系统压力下降。如果这个气泡足够大,液相泵将不能输送任何溶剂,而且如果压力低于预先设定的压力低限,泵将停止工作。当一个气泡通过输液泵时,由于系统压力大,气泡通常会溶解在流动相溶液中,随流动相通过柱子。但是到达检测器流通池时系统压力又恢复到了大气压,因而气泡可能在检测器流通池中又显现,在色谱图上会出现不规律的毛刺。

  二、脱气方法

  1、吹氦脱气法。

  利用氦气在液体中溶解度比空气低的特性,在0.1MPa 压力下,以约60 mL/min 流速通入流动相储液容器中10~15min,可以很有效地从流动相中排除溶解的空气,能排除接近80%的氧气。采用一个高效分布式喷射流装置,一体积的氦气可从流动相中将等体积的几乎全部气体排除。这意味着1L 氦气通过1L 流动相就可完成排气这个工作。这种脱气方法虽然好,但氦气价格较高,很少使用。

  2、加热回流法。

  此法的脱气效果较好。在操作时要注意冷凝塔的冷却效率,否则溶剂会丢失,混合流动相的比例会有变化。

  3、抽真空脱气法。

  此法可使用真空泵,降压至0.05~0.07MPa ,即可除去溶解的气体。但是由于真空脱气会使混合溶剂组成发生变化,从而影响到实验的重现性,因此多用于单溶剂体系的简单分析。

  4、超声波脱气法。

  将欲脱气的流动相置于超声波清洗机中,用超声波震荡10~20min。此法的脱气效果最差。

标签: 高效液相色谱仪
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  在线脱气机接于HPLC的流动相存储液瓶与高压恒流泵之间。流动相经由在线脱气机的入口进入脱气机中,在独立的单元真空泵腔内,通过预先设定的真空度,真 空泵连续低速运行,HPLC流动相在泵的作用下流经真空腔内一段很短的Teflon® AF脱气膜管,按照Henry’s定律,在真空作用下,溶剂中溶解的气体通过管壁排出。配了在线脱气机的液相色谱仪再不需要人工超声脱气或氦气脱气。下面我们来了解一下在线脱气机。
 
  问:流行品牌液相色谱仪的在线脱气机有何特点
 
  答:目前大流行品牌的在线脱气机很大部分是使用了TeflonAF脱气管技术。有的流行品牌提供TeflonAF技术脱气机和其他类型脱气机供用户选择,因为价格有不同。
 
  问:如何判别是TeflonAF技术脱气机。
 
  由于TeflonAF技术脱气效率非常高,TeflonAF脱气管路体积很小,仅有不到每路500ul。而普通脱气机的管路每路有12ml。相差巨大。检查仪器性能指标中都有标示这个指标。
 
  问:液相色谱仪一般配原厂的在线脱气机,还是说可以配其他品牌的脱气机?
 
  答:如果原厂配的是TeflonAF的在线脱气机,那么脱气效果会很好。但有一个问题是流行品牌液相色谱仪厂家把维修零配件的价格定的太高,难以接受。例如:真空泵,脱气盒,在发生故障时需要更换。这些配件少则5千,多则万元,难以接受。而Easeatech在线脱气机的真空泵和脱气盒的价格要低的多。并且都是原装进口,性能和寿命都非常高。由于在线脱气机是独立的,Easeatech在线脱气机可配所有品牌的液相色谱仪,例如Waters,安捷伦,岛津,戴安。所以新购置一台液相色谱仪,配原厂的脱气机不一定是的选择。配Easeatech在线脱气机更合适。
 
  问:用氦气脱气的四元液相色谱仪是否需要配在线脱气机?
 
  答:氦气脱气也不错。就是用完后还要重新买氦气,很麻烦。如果有经费,还是购一台在Easeatech线脱气机。
 
问:二元双泵液相色谱仪是否要配在线脱气机?
 
  答:二元液相色谱仪属于高压混合类型。要求不高时可以不配在线脱气机,但实验前要用超声脱气机脱气。脱气后的流动相才能倒入流动相瓶中使用。有些麻烦。在要求高的情况下,例如:1)流动相的配比大约相等,如有机相(甲醇):水是50:50,或60:40等,这时气体产生较多,压力会波动较大。2)基线噪音影响到实验的结果,要求更低的基线噪音。在这些情况下排除了泵和检测器本身故障,解决的办法就是配Easeatech在线脱气机。
 
  问:液相色谱仪的脱气机出现故障,需要更换脱气盒,如何处理呢?
 
  答:由于原装脱气盒价格被定的太高,更换费用太高。因次建议购买Easeatech在线脱气机。一劳永逸的解决这个问题。如果是Waters液相色谱仪,也可以用Easeatech的脱气盒代替原装的,价格要低很多。安装没有任何问题。因为接口和形状都完全一样。


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