分光光度计的使用步骤主要有哪些?
以下相关工程师做如下介绍：
1.把分光光度计电源线连接好，仪器的电源具备接地功能;
2.接通电源后，按动开机开关，然后让仪器预热至少20分钟；
仪器会自动校正，然后显示546.0nm 0.000A说明自检结束，就可以开始测试;
3.使用“方式”键测试的方式，再根据自己要测量的结果选透光率、吸光度、和浓度的测试;
4.要对波长进行分析，选择按键6，然后按提示依次进行;
5.把样品溶液和要测定的溶液各自倒入比色皿中后；
然后打开样品盖，把盛着溶液的比色皿插入另一个比色皿中，最后盖好样品盖;
6.把参比的溶液拉到光路中按住“OABS/100%T”键；
这时的显示器会显示出BLANKING,，直到最后显示出“100%T”或者是“0.000A”为止;
7.最后仪器显示出“100%T”或者是“0.000A”即可结束测试。
这时被测样品的透光度、吸光度等参数就可直接读出;
8.分光光度计使用完毕，关上电源，取出比色皿洗净，样品室用软布或软纸擦净。
分光光度计的使用注意事项：
1、分光光度计应放在干燥的房间内，使用时放置在坚固平稳的工作台上，室内照明不宜太强。
热天时不能用电扇直接向仪器吹风，防止灯泡灯丝发亮不稳定;
2、分光光度计使用前，使用者应该首先了解分光光度计的结构和工作原理，以及各个操纵旋钮之功能。
在未按通电源之前，应该对仪器的安全性能进行检查，电源接线应牢固；
通电也要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再按通电源开关。
3、在分光光度计尚未接通电源时，电表指针必须于“0”刻线上；
若不是这种情况，则可以用电表上的校正螺丝进行调节。
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导读：
紫外可见分光光度计在生物学的应用分析中, 常见的有蛋白质含量检测;一般是在蛋白质的吸收峰上作吸光度测定。因为蛋白质对紫外光的主要吸收波长为280nm, 所以, 采用光度测量模式, 将仪器的波长GOTO 到蛋白质的zui大吸收峰波长280nm 上, 测试其吸光度大小, 就可完成对蛋白质的定量检测。
目前, 紫外可见分光光度计的应用主要是在定量分析方面。先从生命科学领域的应用来介绍。紫外可见分光光度计在生命科学中应用非常广泛。zui主要的是以下5 个方面。
1. 蛋白质分析工作中的应用
紫外可见分光光度计在蛋白质的分析中, zui主要的是作蛋白质含量检测;一般是在蛋白质的吸收峰上作吸光度测定。因为蛋白质对紫外光的主要吸收波长为280nm, 所以, 采用光度测量模式, 将仪器的波长GOTO 到蛋白质的zui大吸收峰波长280nm 上, 测试其吸光度大小, 就可完成对蛋白质的定量检测。
2. 核酸分析工作中的应用
紫外可见分光光度计在核酸分析中的应用, 主要是用来对核酸的定量检测; 因为核酸的吸收峰在260nm。我们只要采用光度测量模式, 将紫外可见分光光度计的波长GOTO 到核酸的zui大吸收峰260nm 上, 测试其吸光度大小就是了。
3. 氨基酸分析工作中的应用
紫外可见分光光度计在氨基酸分析中的应用, 主要是用来对氨基酸的定量检测。因为氨基酸对紫外光的主要吸收波长为230nm, 所以, 我们只要采用光度测量模式, 将紫外可见分光光度计仪器的波长GOTO 到氨基酸的zui大吸收峰230nm 上, 就可测试其吸光度大小, 从而计算出氨基酸的含量。但是, 因为氨基酸分析时, 一般是将它溶解在水中, 而水在230 nm 附近有很多干扰吸收线, 所以, 在用紫外可见分光光度计对氨基酸分析检测时, 要注意防止干扰的问题。此外, 还需注意: 只有少数氨基酸有紫外吸收, 多数氨基酸无紫外吸收或很弱, 测定时要衍生化后再测。
4. 糖类分析测试工作中的应用
紫外可见分光光度计在糖的分析中, 主要是作定量检测。因为糖对紫外光的主要吸收波长为218nm, 所以, 对糖类进行分析时, 只要采用光度测量模式, 将紫外可见分光光度计仪器的波长GOTO 到氨基酸的zui大吸收峰218 nm上, 就可测试其吸光度大小, 从而计算出糖的含量。
5. 多糖分析测试工作中的应用
紫外可见分光光度计在多糖的分析中, 主要也是作定量检测。因为多糖对紫外光的主要吸收波长为206nm, 所以, 我们只要采用光度测量模式, 将紫外可见分光光度计仪器的波长GOTO 到多糖的zui大吸收峰206 nm 上, 就可测试其吸光度大小, 从而计算出多糖的含量。
但是多糖的分析难度很大。因为, 在206 nm 处的时候, 光源(氘灯) 的能量已经很弱, 仪器光学系统的能量输出也很低, 光电倍增管的灵敏度也很低, 206nm 左右的干扰也很大。所以, 用紫外可见分光光度计作多糖的分析是很难的事, 目前许多科学家正在研究中。
紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同；
因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息。可以用标准光图谱再结合其它手段进行定性分析。
根据Lambert-Beer定律说明光的吸收与吸收层厚度成正比，比耳定律说明光的吸收与溶液浓度成正比;如果同时考虑吸收层厚度和溶液浓度对光吸收率的影响，即得朗伯-比耳定律。
即A=εbc，(A为吸光度，ε为摩尔吸光系数，b为液池厚度，c为溶液浓度)就可以对溶液进行定量分析。
将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见吸收光谱。
若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。如果没有标样，也可以和现成的标准谱图对照进行比较。这种方法要求仪器准确，精密度高，且测定条件要相同。
实验证明，不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同，这可以利用紫外光谱来判断化合物在不同溶剂中氢键强度，以确定选择哪一种溶剂。
应用：
在水和废水监测中的应用，对于一个水系的监测分析和综合评价，一般包括水相(溶液本身)、固相(悬浮物、底质)、生物相(水生生物)。
在水质的常规监测中，紫外可见分光光度法占有较大的比重。由于水和废水的成分复杂多变，待测物的浓度和干扰物的浓度差别很大，在具体分析时必须选择好分析方法。
在农产品和食品分析中可用于检测的组分或成分有蛋白质、赖氨酸、葡萄糖、维生素C、硝酸盐、亚硝酸盐、砷、汞等；
在植物生化分析中可用于检测叶绿素、全氮和酶的活力等；
在饲料分析中可用于检测烟酸、棉酚、磷化氢和甲酯等。
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