色谱柱在使用前,可以进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;另外,在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是较佳条件),只有这样,测得的结果才有可比性。
1、样品的前处理:
a、可以使用流动相溶解样品。
b、使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
2、流动相的配制:
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的,因此要求流动相具备以下的特点:
a、流动相对样品具有一定的溶解能力,保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
b、流动相具有一定惰性,与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。
c、流动相的黏度要尽量小,以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果;同时降低柱压降,延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器,可以使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
e、流动相沸点不要太低,否则容易产生气泡,导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后,一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测,还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
3、流动相流速的选择:
因柱效是柱中流动相线性流速的函数,使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱,要追求较佳柱效,可以使用较佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱,流速一般选择1ml/min,对于内径为4.0mm柱,流速0.8ml/min为佳。
当选用较佳流速时,分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时,可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
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液相色谱仪检测器阻塞的现象有:系统压力增高,松开检测器进口的接头压力降至正常水平。检测器部分有三处易发生阻塞,即进口管路、流通池和出口管路。因组设造成压力显著增高,虽然用一般的净化方法去掉阻塞可能不奏效,但值得一试。如用注射器回抽池中的溶剂受到很大阻力,说明阻塞相当严重。若是检测仪器厂商标明池能耐高压,可用泵反冲,这样常可去掉阻塞压力,注意压力不要超过6MPa~7MPa。标准池一般耐压在3~5MPa左右,不可用此法。
用以上方法试验不能成功疏通检测器通道阻塞时,可将流通池从检测器中拆下来,将进口管路卸下,用泵方向冲洗。然后再冲洗出口管路。如果进出口管路都是通畅的,那么就是流通池本身阻塞。
进口管路是最易发生堵塞的地方,用小径的管路可以挡住进入检测器的微粒。但有下列情形者在进口处可发生堵塞:
1、自己填装的柱在出口处留下填料微粒;
2、修复柱时逆向反冲时间不够就接到检测器上;
3、逆向反冲时原柱头密封性能不好,填料漏出。
如果堵塞循环发生,应在柱和检测器之间装一个没有死体积的在线过滤器。拆下进口管路反接到泵上反冲,可以疏通堵塞。
对一些顽固性阻塞而又不能从池上拆开的管路,可以从管路进口处切掉大约1~2cm长的管子。当然这是一种无可奈何的选择,因为每次操作后会使得管子变短,还涉及到换刃环接头等,还可能会因为切口不平整、密封不严等造成渗漏。
若用以上方法都不能疏通疏通进口管路,应考虑更换新管子或请厂商修理。出口管路阻塞,也可参照上述方法进行处理。
【导读】液相色谱操作人员在操作时应该注意的一些事项:1、作为液相操作人员,一定要认真学习液相的说明书,掌握液相硬件和软件的操作,掌握日常的维护保养,掌握最基础故
液相色谱操作人员在操作时应该注意的一些事项: 仪器网-专业分析仪器服务平台,实验室仪器设备交易网,仪器行业专业网络宣传媒体。 相关热词: 等离子清洗机,反应釜,旋转蒸发仪,高精度温湿度计,露点仪,高效液相色谱仪价格,霉菌试验箱,跌落试验台,离子色谱仪价格,噪声计,高压灭菌器,集菌仪,接地电阻测试仪型号,柱温箱,旋涡混合仪,电热套,场强仪万能材料试验机价格,洗瓶机,匀浆机,耐候试验箱,熔融指数仪,透射电子显微镜。
1、作为液相操作人员,一定要认真学习液相的说明书,掌握液相硬件和软件的操作,掌握日常的维护保养,掌握最基础故障的排除和维修。
一般液相的操作规程也是有操作人员起草的,所以只要严格按照操作要求进行操作,一般不会出现问题。当然啫喱需要特别指出的是对于液相的日常维护保养很重要,比如流动相的过滤、脱气、泵密封垫的清洗、系统管路的清洗、溶剂过滤头的清洗等,倘若不坚持,很容易导致色谱柱堵塞、系统压力过大、色谱峰异常等不必要的故障,浪费时间。
2、操作人员在配制液相分析用样品溶液时,可以由同一个人单独完成,以免不必要的偶然误差。