凝胶渗透色谱仪的数据处理 色谱仪如何操作

由于GPC/SEC的分离机理是按照分子尺寸的大小进行分离的，不考虑溶质和载体之间的吸附效应，也不考虑溶质在流动相和固定相之间的分配效应，其淋出体积（自试样进柱到被淋洗出来所接收到的淋洗液总体积）仅由溶质分子尺寸和载体的孔洞尺寸决定，与分子量只是间接的关系。不同的高分子，虽然分子量相同，但分子体积并不一定相同。例如，线形PE和支化PE，虽然有相同的分子量，但分子尺寸后者比前者小。因此，在同一根柱子和相同的测试条件下，不同的高分子试样由于分子链形态不同，所得到的分子量—淋出体积校正曲线并不重合。为此，在测定某种聚合物的分子量分布时，都需要有这种聚合物的单分散（或窄分布）试样所求得的专用的校正曲线，而单分散（或窄分布）试样不容易得到，只有很少的高聚物能制得窄分布的标准试样，这给测试工作带来极大的不便。对此通常采用能够制得窄分布标准样的聚合物聚苯乙烯（PS，溶于各种有机溶剂）、聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA，溶于有机溶剂）、聚环氧乙烷（PEO，也叫聚氧化乙烯，溶于水）、聚乙二醇（PEG，溶于水）代替，因此用GPC采用实验数据后要对数据进行校正处理，才能得到尽可能真实的相对分子量。

    高效液相色谱仪中，保护柱安装在进样器和分析柱之间，通过流动相和样品溶液。保护柱是液相色谱分析中重要的色谱耗材，使用保护柱可大大降低分析柱受污染的程度，延长分析柱使用寿命。保护柱位于进样器与分析柱之间，作用主要两方面：

    1.截留不溶性颗粒
    2.吸附样品基质中的杂质
    一、如何选择保护柱：
    1.保护柱的填料，与分析柱保持一致!填料品牌一致，才能100%确保选择性一致。
    2.保护柱的规格，要与分析柱匹配!填料粒径一致，保护柱的内径与分析柱的内径相近。
    3.对于精细分离，保护柱本身的装填柱效要足够好!
    4.对于精细分离或者小内径色谱柱分离，保护柱的连接死体积要尽可能小。
    5.如果是用于UHPLC柱，还要考虑保护柱的耐压能力。
    保护柱不理想，就会导致峰扩散，分离度下降，不利于精细分离。
    理想的保护柱，即使分析柱短小如4.6×100mm，安装保护柱后也未引起分离度与峰高的降低。
    二、如何使用保护柱：
    1.专柱专用。避免保护柱成为不同项目的交叉污染源。
    2.及时更换保护柱。当峰的理论塔板数下降15%，或是柱压上升15%，或是关键分离度下降15%时，都应该及时更换保护柱。
    3.不慎发生强污染时，可以将分析柱卸下，单独冲洗保护柱，可以使污染物更快的从保护柱中流出。——但是不可以超声保护柱。
    三、保护柱使用注意事项：
    1.独立式保护柱与分析柱连接时，连接管路尽可能短，且接口切面平滑，尽量减少死体积以降低柱外展宽效应。
    2.卡套式保护柱一般未标注液流方向，使用时可以自行标注，并按照标注方向来使用，以免正反向使用后，截留的杂质污染分析柱。
    3.直接填装的短柱型保护柱，出现柱压升高或峰型变差时，可不接分析柱进行反向清洗，清洗溶剂可参考分析柱清洗溶剂。
    4.卡套式保护柱，柱芯替换时，注意柱芯与柱套是否存在方向上的匹配，同时不易旋拧过紧，以防滑丝。
    5.保护柱或柱芯一般不建议超声清洗，因可能对填料表面修饰有影响。
    6.如同一保护柱配不同的分析柱使用，每次使用前，保护柱需先清洗并用流动相平衡保护柱一段时间后，再接分析柱使用。