液相色谱仪根据固定相是液体或是固体,又分为液-液色谱(LLC)及液-固色谱(LSC)。现代液相色谱仪由高压输液泵、进样系统、温度控制系统、色谱柱、检测器、信号记录系统等部分组成。与经典液相柱色谱装置比较,具有高效、快速、灵敏等特点。
液相色谱仪操作步骤:
1. 首先对流动相进行过滤,根据需要选择不同的滤膜,一般为有机系和水系,常用的孔径为0.20um和0.45um。
2. 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3. 正常情况下,仪器首先用甲醇冲洗10-20分钟,然后再进入测试用流动相(如流动相为缓冲试剂,则要二次重蒸水冲洗10-20分钟,直至色谱柱中有机相冲净为止) 。
4. 一般情况下,流动相冲洗20-30分钟后,仪器方可稳定,重要的是仪器基线走后,方可进样测试。
5. 同时进两针标样,将其结果相比较,其结果的比值在0.98-1.02之间后,就可以正式进行样品的测试了。
6. 样品测试结束后,就要进行色谱仪及色谱柱的清洗和维护。如流动相为缓冲试剂,同样也要用重蒸水清洗10-20分钟,方可用有机相进行保护,否则,有损色谱柱。
7). 关机时,先关计算机,再关液相色谱。
液相色谱注意事项:
1. 流动相均需色谱纯度,水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
2. 柱子是非常脆弱的,第一次做的方法,先不要让液体过柱子。
3. 所有过柱子的液体均需严格的过滤。
4. 压力不能太大,可以不要超过150kgf/cm2 .
5. 因为缓冲试剂遇有机溶剂,会结晶,有损色谱柱,所以,每次由有机相变流动相或流动相变有机相均需用蒸馏水清洗。
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高效液相色谱仪是实验中常见的仪器之一,色谱柱的灵敏度是确保实验准确性的重要原因,那么当色谱柱的灵敏度不够时,我们该如何去解决呢?应该从以下几个方面去分析:
1、样品量不足:解决办法为增加样品量
2、样品未从柱子中流出:可根据样品的化学性质改变流动相或柱子
3、样品与检测器不匹配:根据样品化学性质调整波长或改换检测器
4、检测器衰减太多:调整衰减即可。
5、检测器时间常数太大:解决办法为降低时间参数
6、检测器池窗污染:解决办法为清洗池窗。
7、检测池中有气泡:解决办法为排气。
8、记录仪测压范围不当:调整电压范围即可。
9、流动相流量不合适:调整流速即可。
10、检测器与记录仪超出校正曲线:解决办法为检查记录仪与检测器,重作校正曲线。