高效液相色谱仪的正确安装事项如下:
1、要注意防止灰尘玷污光学元件
该仪器很多检测器都是属于光学类的分析仪器,这些光学元件很容易受到灰尘玷污,光学元件一旦被玷污,就会引起很多麻烦。与光学元件受潮后效果一样,主要是使光学元件的反射率降低,从而影响仪器的灵敏度。另外,还会使得杂散光增大,噪声增大,减低检测器的灵敏度,使得分析测试的误差增大。因此,安放本该仪器的房间要干净、通风、防尘,同时还要注意防止震动。
2、要注意防止干扰
要注意防止电、磁场的干扰。电、磁场的干扰是影响高效液相色谱仪稳定性的重要因素。一般来讲,安放该仪器的房间,应该远离电场、磁场干扰。
3、要注意防湿防潮
本仪器是光、机、电、计算机四位一体的、技术密集的高科技产品,它的每一个部分都不允许受潮。否则,将会使有关的元器件损坏或性能变坏,影响仪器的稳定性。
注:使用高效液相色谱仪时,液体待检测物被注入色谱柱,通过压力在固定相中移动,由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同,不同的物质顺序离开色谱柱,通过检测器得到不同的峰信号,最后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重要的分析方法,广泛的应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别,它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相,适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。
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早期使用隔膜和停流进样器,装在色谱柱进口处。现在大都使用六通进样阀或自动进样器。
进样装置要求:密封性好,死体积小,重复性好,保证中心进样,进样时对色谱系统的压力、流量影响小。HPLC进样方式可分为:隔膜进样、停流进样、阀进样、自动进样。
1.隔膜进样。
用微量注射器将样品注进专门设计的与色谱柱相连的进样头内,可把样品直接送到柱头填充床的中心,死体积几乎即是零,可以获得较佳的柱效,且价格便宜,操纵方便。但不能在高压下使用(如10MPa以上);此外隔膜轻易吸附样品产生记忆效应,使进样重复性只能达到1~2%;加之能耐各种溶剂的橡皮不易找到,常规分析使用受到限制。
2.停流进样。
可避免在高压下进样。但在HPLC中由于隔膜的污染,停泵或重新启动时往往会出现“鬼峰”;另一缺点是保存时间不准。在以峰的始末信号控制馏分收集的制备色谱中,效果较好。
3.阀进样。
一般HPLC分析常用六通进样阀(以美国Rheodyne公司的7725和7725i型常见),其关键部件由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成。由于阀接头和连接管死体积的存在,柱效率低于隔膜进样(约下降5~10%左右),但耐高压(35~40MPa),进样量正确,重复性好(0.5%),操纵方便。
4.自动进样。
用于大量样品的常规分析。