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专家浅析液相色谱仪未来发展的趋势 液相色谱如何操作

时间:2020-07-03    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     
【导读】当前液相色谱仪器厂商推出的高效液相色谱仪和超高效液相色谱仪,从仪器的外观设计、相关仪器组件的配置、仪器使用功能的扩展等方面来看,都反映了近年来各个厂商在仪器的设计,硬件配备、软件开发等方面取得的重

当前液相色谱仪器厂商推出的高效液相色谱仪和超高效液相色谱仪,从仪器的外观设计、相关仪器组件的配置、仪器使用功能的扩展等方面来看,都反映了近年来各个厂商在仪器的设计,硬件配备、软件开发等方面取得的重要进展。

 1、高效液相色谱仪器的发展方向
 主要是高端的用于科研的通用型仪器和应用于常规分析的专用型高效液相色谱仪。
 高端科研通用型仪器
 这部分仪器主要以Agilent、Waters、Dionex、ThermoFishier等国外知名厂家为主,国内的厂商上海通微生产的trisepTM2100PCECsystem【加压毛细管色谱(PCEC)、微径液相色谱(UHPLC)和毛细管电泳(CE)三合一仪器】,在国外有一定的销售量。
 常规分析的专用型高效液相色谱仪
 占有高端市场的国外产品的厂商,近年也针对中国市场现状,以及常规分析专用型高效液相色谱仪市场,生产了适用于常规分析、造价低的专用型高效液相色谱仪.
 国内的液相色谱厂商在这个市场上的优势是多种型号、价格适当的高效液相色谱仪。在此类仪器中,备受关注的仪器有:
 依利特P1201型高效液相色谱仪、福立FL-2200-2型高校液相色谱仪、伍丰LC-100型智能全控高效液相色谱仪、东西LC5510型高效液相色谱仪在仪器外观设计上有重大改进,已经与国外仪器相近。
 依利特公司和通微公司都是生产了激光诱导荧光检测器。
 优联公司生产的UC-3281型超小型输液泵、UC-2191型超小型UVD可组成UC3231型超小型高效液相色谱仪,在国内首次出现,是很有发展前景的新型仪器。
 2、超高效液相色谱仪的发展
 自从2004年Waters公司推出了ACQUITYUPLC后,Agilent、Dionex、CVC、Jasco等公司都先后推出了各自的超高效液相色谱仪,都在力争实现快速、超高效的液相色谱分析的理想结果。
 虽然各个厂家采用的科技路线有所不同,但在超高效液相色谱柱的研制上却有共同的特点,即采用了粒度在1.7-2.2um的微粒固定相和小内径(1~2mm)的色谱柱,这也是他们获得高柱效的根本原因。
 超高效液相色谱技术的实现,主要是依靠以下几个方面的进步:
 (1)小颗粒、高性能微粒固定相的出现;
 (2)超高压输液泵的使用;
 (3)高速采样速度的灵敏检测器;
 (4)使用低扩散、低交叉污染自动进样器,配备了针内进样探头和压力辅助进样技术;
 (5)仪器整体系统优化设计:色谱工作站配备了多种软件平台,实现超高效由于液相分析方法与高校液相分析方法的自动转换。
 超高效液相色谱仪由于具有高速、高效分析性能,在国外已经大力推广使用,在国内至今还未引起足够的重视,并且由于国内制造技术的限制,至今仍无国内厂商开展超高效液相色谱仪的研制。

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异常的色谱峰指的是色谱图中的无峰或出现负峰、宽峰、双峰、肩峰、峰形不对称等情况。一般来说,异常峰是实验工作中较为棘手的问题。异常峰的出现会影响色谱分析的结果。通常情况下,峰型问题是由分离系统所决定的。在做液相过程中,我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型,对于各种各样的异常峰,要区别对待,从主要问题出发,一个一个加以解决。
 

  1.色谱图中未出峰
 

  系统未进样或样品分解;泵未输液或流动相使用不正确;检测器设置不正确
 

  2.一个峰或几个峰是负峰
 

  流动相吸收本底高;进样过程中进入空气;样品组分的吸收低于流动相。
 

  3.所有峰均为负峰
 

  信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒;光学装置尚未达到平衡。
 

  4.所有峰均为宽峰
 

  系统未达到平衡;溶解样品的溶剂极性比流动相差很多;色谱柱尺寸及类型选择不正确;色谱柱或保护柱被污染或柱效降低;温度变化造成的影响。
 

  5.所出峰比预想的小
 

  样品黏度过大;进样品故障或进样体积误差;检测器设置不正确.定量环体积不正确;检测池污染;检测器灯出现问题。
 

  6.出现双峰或肩峰
 

  进样量过大;样品浓度过高;保护柱或色谱柱柱头堵塞;保护拄或色谱柱污染或失效;柱塌陷或形成短通道。
 

  7.前伸峰
 

  进样量或样品浓度高,溶解样品的溶剂较流动相极性强;保护柱或色谱柱污染或失效。
 

  ①柱温低:升高柱温;②样品溶剂选择不恰当:使用流动相作为样品溶剂;③样品过载:降低样品含量;④色谱柱损坏:更换柱子。
 

  8.拖尾峰
 

  柱超载,降低样品量;增加柱直径采用较高容量的固定相;峰干扰,对样品进行清洁过滤;调整流动相;硅羟基作用,加入三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值;柱内烧结不锈钢失效,更换烧结不锈钢;加在线过滤器,对样品进行过滤;死体积或柱外体积过大,将连接点降至谷值;尽可能使用内径较细的连接管;柱效下降,更换柱子;采用保护柱,对柱子进行再生。
 

  9.出现平头峰
 

  检测器设置不正确;进样体积太大或样品浓度太高。
 

  10.出现鬼峰
 

  进样阀残余峰,可能为上次样品的残余。在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统;样品中存在未知物,改进样品的预处理;流动相污染,更换新流动相,尽可能现配现用,隔夜的流动相再次使用时要过滤;尽可能使用HPLC级试剂;流路中有小的气泡,打开Purge阀,加大流速排除。
 

  11.峰分叉
 

  ①保护柱或分析柱污染:取下保护柱再进行分析,如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。②样品溶剂不溶于流动相改变样品溶剂,如果可能采取流动相作为样品溶剂。
 

  12.峰变形
 

  样品过载,减少样品载量。
 

  13.早出的峰变形
 

  样品溶剂选择不恰当 ①减少进样体积 ②运用低极性样品溶剂
 

  14.早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
 

  柱外效应 ①调整系统连接(使用更短、内径更小的管路) ②使用小体积的流通池
 

  15.酸性或碱性化合物的峰拖尾
 

  缓冲不合适①使用浓度50~100 mM的缓冲液②使用Pka等于流动相pH值的缓冲液
 

  16.额外的峰
 

  (1)样品中有其他组分:正常现象;
 

  (2)前一次进样的洗脱峰:①增加运行时间或梯度斜率②提高流速;
 

  (3)空位或鬼峰:①检查流动相是否纯净 ②使用流动相作为样品溶剂 ③减少进样体积。

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