本品为豆科植物大豆Glycine max(L.)Merr.的成熟种子发芽干燥而得。大豆用水浸泡至膨胀,将水放出,用湿布覆盖,每日用清水冲洗一次或喷淋二次,待芽长至0.5cm~1cm时,取出,干燥。
【性状】 本品略呈肾形,长约8mm,宽约6mm。表面黄色或黄棕色,微皱缩,一侧有明显的脐点,一端有1弯曲胚根。外皮质脆,多破裂或脱落。子叶2片,黄色。气微,味淡,嚼之有豆腥味。以粒大、饱满者为佳。
【鉴别】 (1)取本品粉末1g,加稀乙醇30ml,超声处理30分钟,离心(3000转/分钟)10分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加稀乙醇1ml使溶解,取上清液,作为供试品溶液。另取亮氨酸对照品,加稀乙醇制成每1ml 含0.5mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验,吸取上述两种溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水(19:5:5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以茚三酮试液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(2)取本品粉末2g,加80%乙醇30ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加80%乙醇1ml使溶解,取上清液,作为供试品溶液。另取染料木苷对照品,加80%乙醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录Ⅵ B)试验,吸取供试品溶液5~10μl、对照品溶液2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-甲醇-水(10:1.7:1.3)为展开剂,展开缸中预饱和30分钟,展开,取出,晾干,喷以2%三氯化铝乙醇溶液,在105℃加热数分钟,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
【检查】水分 不得过11.0%(附录Ⅸ H)。
总灰分 不得过7.0%(附录Ⅸ K)
【含量测定】 照高效液相色谱法(附录Ⅵ D)测定。
色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇为流动相A,以1%醋酸溶液为流动相B,按下表进行梯度洗脱;柱温35℃;检测波长为260nm。理论板数按大豆苷、染料木苷峰计算均不得低于5000。
对照品溶液的制备 取大豆苷、染料木苷对照品各约10mg,精密称定,置50ml量瓶中,加70%甲醇至刻度,摇匀;精密量取1ml,置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末(过**筛)约1.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇25ml,称定重量,加热回流2小时,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,离心(2000转/分钟)10分钟,取上清液,滤过,取续滤液,即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl,注入液相色谱仪,测定,即得。
本品按干燥品计算,含大豆苷(C21H20O9)和染料木苷(C21H20O10)的总量不得少于0.08%。
【炮制】 取灯心草、淡竹叶置锅内,加入适量水煎煮二次,**次60分钟,第二次30分钟,合并煎液,滤过。滤液与大豆黄卷共置锅内,煮至药液被吸尽,取出,干燥。
每100kg净药材用灯心草1kg、淡竹叶2kg。
Syltech500型高效液相色谱仪(单泵配置/梯度)
1 泵 P501型恒流高压输液泵
1.1 液体输送原理:双柱塞串联往复方式,自动脉冲抑制系统,另配有溶剂压缩因子程序,能自动补偿流量,液体输送更精准
1.2 *大输送压力:大于等于6000PSI(约42MPa以上)
1.3 流速精度:0.1%
1.4 流速范围:(0.001-10.000)mL/min*小增量0.001mL/min
1.5 柱塞杆清洗:不需另配设备即可自动柱塞杆清洗,保护柱塞杆
1.6 安全性:配有开机自检,高低压报警和保护功能
1.7 梯度系统:二元梯度混合系统/单泵系统
1.7.1 混合范围:0到100%
1.7.2 混合原理:高压混合
1.7.3 混合液体数:大于等于2元
1.7.4 脱气装置:内外置脱气均可
2 紫外检测器UV501型紫外可变波长检测器
2.1 光源:氘灯(钨灯可选)氘灯寿命2000个小时,保证使用寿命1000小时以上
2.2 波长范围:190到720nm(步增1nm)
2.3 波长准确度:<±1nm
2.4 波长重现性:<±0.5nm
2.5 带宽:小于5nm
2.6 噪音:<±2.5*10-5AU(特定条件下)
2.7 漂移:<±2.5*10-4AU(特定条件下)
2.8 流通池体积:10ul体积、光程10mm
2.9 吸收量程:0.01AU/V-10AU/V(共十档)进样信号控制(事件),自动调零
2.10 功能:具有定点波长测量,数据处理硬件嵌入检测器,数字信号直接采集处理功能
3 色谱柱:VertexTMXB-C18 4.6*250mm*5um 液相色谱柱、配保护柱
4 柱温箱:室温上10度到100度(0.1度增量)
5 N2010药典版色谱工作站" href="http://www.18show.cn/product/st621.html" target="_blank">色谱工作站:色谱工作站(满足2010版药典要求,美国制作)中英文操作软件,支持WIN9X/XP/2000/2003等操作系统,硬件嵌入检测器,数字信号直接采集处理
6 Vertex7825i手动进样阀:Vertex7825i手动进样阀(带远程触发开关),自带20UL定量,耐压8000psi,进样次数超1万次以上
高效液相色谱仪适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质,因而广泛为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中针对这种精密而又运用广泛的科学仪器。
下面我们来聊一聊基线。HPLC常见的基线问题主要有基线漂移以及基线噪音。
基线漂移
线漂移基线漂移是色谱工作者普遍遇到的问题。一般说来,机器刚起动时,基线容易漂移,大概要30min的平衡时间,如果用了缓冲溶液、缓冲盐,或者在低波长下(220nm)平衡时间相对会比较长,仍然发现基线漂移,原因可能有以下几种:
1、柱温波动
控制好柱子和流动相的温度,检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。
2、流通池被污染或有气体
用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池(尽量断开柱子)。如有需要,可以用1N的硝酸(不要用盐酸)。
3、紫外灯能量不足
更换新的紫外灯
4、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。检查流动相的组成,使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。
基线噪音
对于紫外检测器,氘灯光源打开后要预热30min以上,基线才能稳定。噪声是指与被测物无关的检测器输出信号的随机扰动变化,分短期噪声和长期噪声两种。
基线噪音(规则的)
产生基线噪音的原因有:在流动相、检测器或泵中有空气;漏液;流动相混合不完全;温度影响(柱温过高,检测器未加热);在同一条线上有其他电子设备;泵振动。
了避免基线噪音,在正式进样之前,需要对流动相脱气;冲洗系统以除去检测器或泵中的空气;检查管路接头是否松动;泵是否漏液;是否有盐析出和不正常的噪音,如有必要,更换泵密封;用手摇动使溶剂混合均匀或使用低粘度的溶剂减少差异或加上热交换器;有其他电子设备时断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正;泵振动时在系统中加入脉冲阻尼器。
基线噪音(不规则的)
(1)漏液:检查接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换密封,检查流通池是否漏液。
(2)流动相污染、变质或由低质溶剂配成:检查流动相的组成。
(3)流动相各溶剂不相溶:选择互溶的流动相。
(4)检测器/记录仪电子元件的问题:断开检测器和记录仪的电源,检查并更正。
(5)系统内有气泡:用强极性溶液清洗系统;检测器内有气泡,清洗检测器,在检测器后面安装背景压力调节器。
(6)流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音):用硝酸清洗流通池;
(7)检测器灯能量时不足更换灯;
(8)色谱柱填料流失或阻塞:更换色谱柱。
(9)流动相混合不均匀或混合器工作不正常:维修或更换混合器,在流动相不走梯度时,不建议使用泵的混合装置。
高效液相色谱仪操作步骤如下:
1)过滤流动相,根据需要选择不同的滤膜.
2)对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3)打开hplc工作站(包括计算机软件和色谱仪),连接好流动相管道,连接检测系统。
4)进入hplc控制界面主菜单,点击manual,进入手动菜单。
5)有一段时间没用,或者换了新的流动相,需要先冲洗泵和进样阀。
6)调节流量,初次使用新的流动相,可以先试一下压力,流速越大,压力越大,一般不要超过2000。
7)设计走样方法。
8)进样和进样后操作。
9)关机时,先关计算机,再关液相色谱。
10)填写登记本,由负责人签字。
11)流动相均需色谱纯度,水用20m的去离子水。
12)柱子是非常脆弱的,第一次做的方法,先不要让液体过柱子。
13)所有过柱子的液体均需严格的过滤。
14)压力不能太大,可以不要超过2000psi。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。
1、氘灯外罩污染:不要用手直接接触氘灯外罩,手上含有的油脂类物质会阻碍氘灯的光源的发射光,导致读数偏低。一旦不小心用手直接接触到了氘灯,在氘灯安装之前可用异丙醇对氘灯做清洁工作。 2、氘灯的开关频率:频繁的开关及过长时间的开灯等都会对灯的寿命产生影响,一般氘灯点亮后须要30分钟左右的稳定时间。特别注意的是在氘灯刚刚关闭时要等其冷却之后才能再次开启。因为氘灯如果在未冷却状态时被打开,很可能造成灯丝整体结构的烧坏。 3、避免剧烈物理震荡:如灯是亮着的话,很可能将灯丝弄坏甚至是弄断。(因为当氘灯点亮时其温度有2700K度,此时灯丝几乎是液态的。) 4、可更换氘灯的信号: a、灯的外壳边缘看不见蓝色的光线。(肉眼可见); b、石英外套变黑。(灯关时进行检查,冷却并更换); c、之前分析方法中从未出现过的非线形现象(光的吸收率不为线形); d、在正常设置情况下基线漂移严重; e、正常进样时不出峰。液相色谱仪氘灯使用的注意事项