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液相色谱仪流动相的选择原则液相色谱常见问题解决方法

时间：2020-07-10 来源：仪多多仪器网作者：仪多多商城

液相色谱仪分析中，选择流动相时应考虑流动相与填料的作用、纯度、与检测器的匹配、粘度、对样品的溶解度和样品回收等方面。

一、流动相与填料的作用：

流动相应不改变填料的任何性质。

低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。

碱性流动相不能用于硅胶柱系统。

酸性流动相不能用于氧化铝和氧化镁等吸附剂的柱系统。

二、纯度：

色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。

三、与检测器的匹配：

当使用UVD时，所用流动相在检测波长下应没有吸收或吸收很小。

当使用RID时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。

四、粘度：

高粘度溶剂会影响溶质的扩散和传质，使柱效降低，还会使柱压增加，分离时间延长。尽量选择沸点在100℃以下的流动相。

五、对样品的溶解度：

如果溶解度欠佳，样品会在色谱柱内沉淀，不但影响纯化分离，而且会使色谱柱恶化。

六、样品回收：

应选用挥发性溶剂。

　　现代液相色谱中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择中。但是色谱填料的选择范围很宽，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。

　　硅胶基质填料:

　　1、正相色谱

　　正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)，以及其他具有极性官能团，如胺基团(ZH2,APS)和氰基团(CN，CPS)的键合相填料。

　　由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他团的极性教强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强落的组份zui先被冲洗出色谱柱。

　　正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷(Hexane),氯(Chloroform)二氯甲烷(Methylence Chloride)等。

　　2、反相色谱

　　反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对教弱的官能团的键合相。

　　反相色谱所使用的流动相极性教强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。

　　样品流出色谱柱的顺序是极性教强组合zui先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。

　　常用的反相填料有C18(ODS) C8(MOS)。C4(B)C6H5(Phenyl)等。

　　聚合物填料：

　　聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸至等，其主要优点是在PG值为1-14均可使用。

　　相对与硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的淑水性；大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。

　　现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效教低。

　　其他无机填料

　　其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化。由于其特殊的性质，一般于特殊的用途。如墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料。这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性，该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强，石墨化碳可用于分离某些几何导构体，又由于HPLC流动相中不会被溶解，这类柱可在任何PH与温度下使用。氧化铝也可用于HPLC，氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床，其优点是可在PH高达12的流动相中使用。但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强，应用范围受到一定的限制，所以未能广泛应用，新型氧化诰填料也可用于 HPLC，商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化诰微球色谱柱，应用PH范围1~14，温度可达到1000C。由于氧化诰填料几年才开始研究，加之前的实验难度，其重要用途与优势尚在进行中。

　　怎样选择填料粒度

　　目前，商品化的色谱料粒度从1um到超过30um均有销售，而目前分析分离主要用3,5和10um填料，填料的粒度主要影响填充柱的两个参数，即柱效和背压。粒度越小，填充柱的柱效越高；小于3um的填料应用，在相同选择性条件下，提高柱效可提高分离度，但不是*的因素。如果固定相选择是真确，但是分离度不够，那么选择更小粒度的填料是很用有的，3um填料填充柱的柱数比相同条件下的5UM填料的柱效提高近30%；然而；3um的色相谱的背压却是5um的2倍。与此同时，柱效提高意味着在相同条件下可以选择更短的色谱柱，以缩短分析时间，另外，可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色谱柱的压力。

　　如何保证良好的柱性能与柱寿命

　　认证阅读色谱柱使用说明书

　　使用填充良好的色谱柱

　　尽量减少压力波动，避免机械及热冲击

　　使用保护柱及在线过滤器

　　经常以强溶剂冲洗色谱柱

　　充分过滤样品及流动相，尽量避免杂质微粒与保强留分成

　　用稳定的固定相(C18zui稳定)

　　在中等PH纸操作(6~8)，用有机年成液溶

　　色谱柱使用温度小于400C

　　硅胶基质的的色谱柱，应保持流动相的PH值范围在3.0~8.0

　　在水流动相与缓冲浓液中加200ppm的叠氮钠

　　流动相中含有缓冲溶液，应注意应95∶5的水及有机溶剂过渡，有机溶剂不能低于5%

　　过夜或储存时，冲洗掉盐和缓冲液，用纯有机溶剂流动相保存(乙晴)

　　【中国仪器网使用手册】众所周知，液质联用法是质谱领域的一种技术创新，它具有灵敏度高、通量性能好、优异的高流量性能、降低的离子抑制效应、自清洁离子源探针设计和可靠的接口设计，分析速度快、使用简便等特点。广泛应用于环保、农业、检疫、食品安全等方面的快速分析测试，完全可以胜任农作物、畜禽产品、奶制品及相关加工食品中大批量样品日常法规检测项目分析测试，如食品中农药残留、兽药残留、真菌毒素、添加剂、营养强化剂及有机污染物等项目，

　　目前，在多项食品补充检测方法中均使用液相色谱-串联质谱作为测定法。如食药总局发布《食用油脂中辣椒素的测定》食品补充检验方法、《饮料、茶叶及相关制品中对乙酰氨基酚等59种化合物的测定》、《饮料、茶叶及相关制品中二氟尼柳等18种化合物的测定》等测定方法均采用了液相色谱-串联质谱测定方法。

　　近日，市场监管总局发布《食品中吗啡、可待因、罂粟碱、那可丁和蒂巴因的测定》、《饮料中γ-丁内酯及其相关物质的测定》2项食品补充检验方法。根据公告内容，本次发布的2项检验方法均为液相色谱-串联质谱测定法。

　　其中，《食品中吗啡、可待因、罂粟碱、那可丁和蒂巴因的测定》涉及的测定仪器还包括液相色谱-三重四极杆串联质谱仪：带电喷雾离子源(ESI)；分析天平：感量为0.00001 g；分析天平：感量为0.01 g；离心机：转速≥4 000 r/min；超声波清洗器：功率为800W；涡旋混合器；匀浆机；粉碎机。

　　《饮料中γ-丁内酯及其相关物质的测定》测定的仪器包含液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾(ESI)离子源；分析天平：感量分别为0.01 mg和0.1 mg；涡旋振荡器；离心机：转速≥6000 r/min。

　　目前不少食品药品检验检测机构和部门当中都会配备很多设备，气相色谱仪、液相色谱仪以及各种联用仪器设备都不罕见。随着联用技术的不断发展和扩充，未来这批仪器设备将综合色谱、质谱等多项先进技术的优势，在定量和定性分析能力上有所提升。如果食品药品检验检测国家重点实验室能够落实，我国检测技术攻关将更有效率，国内食品药品安全和质量也能得到更好的技术保障。

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