安捷伦液相色谱仪的规范操作
1. 目的：明确安捷伦液相色谱仪的规范操作，确保数据的准确性。
2. 范围：适用于安捷伦液相色谱仪。
3. 职责：检验人员对此负责。
4. 操作规程：
4.1 系统组成
本系统由1个溶剂二元输送泵（分主/A泵和副/B泵）、手动进样阀、柱温箱、检测器、化学工作站和电脑等组成。
4.2 准备
4.2.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。
4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。
4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。
4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常
4.1 将待测样品按要求前处理，准备安捷伦液相色谱仪所需流动相，检查线路是否连接完好，废液瓶是否够用等。
4.3安捷伦液相色谱仪开机：
4.3.1 打开计算机,进入中文Windows XP画面,并运行CAG Bootp Server程序。
4.3.2 打开安捷伦液相色谱仪 1200 LC 各模块电源。
4.3.3 待各模块自检完成后，双击[Instrument 1 Online]图标，化学工作站自动与1200LC
通讯，进入的工作站画面如下所示。
4.3.4 从[视图]菜单中选择[方法和运行控制]画面, 点击[视图]菜单中的[显示顶部 工具栏]， [ 显示状态工具栏]，[系统视图],[样品视图]，使其命令前有[√]标志，来调用所需的界面。
4.3.5 把流动相放入溶剂瓶中。
4.3.6 打开冲洗阀。
4.3.7 点击[泵]图标，点击[设置泵…]选项，进入泵编辑画面。
4.3.8 设流速：5ml/min，点击[确定]。
4.3.9 点击[泵] 图标，点击[控制…]选项，选中[启动]，点击[确定] ，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。
4.3.10 点击[泵] 图标，点击[控制…]选项，选中[关闭]，点击[确定]关泵， 关闭冲洗阀。
4.3.11 点击[泵]图标，点击 [设置泵…选项]，设流速：1.0ml/min。
4.3.12 点击泵下面的瓶图标，如下图所示（以单元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。 也可输入停泵的体积，点击[确定]。
4.4 数据采集方法编辑
4.4.1开始编辑完整方法：从[方法]菜单中选择[编辑完整方法…] 项，如下图所示选中除[数据分析 ]外的三项，点击[确定]，进入下一画面。 4.4.2方法信息
4.4.2.1在[方法注释]中加入方法的信息（如：测试方法）。 4.4.2.2 点击 [确定]， 进入下一画面。
4.4.3 泵参数设定
4.4.3.1 在[流速]处输入流量,如1ml/min，在[溶剂 B]处输入80.0,(A=100-B) ,也可[插入 ]一行[时间表] ,编辑梯度。在[压力限]处输入柱子的zui大耐高压，以保护柱子。
4.4.3.2 点击[确定]，进入下一画面。
安捷伦液相色谱仪
4.4.4 柱温箱参数设定
4.4.4.1 在[温度]下面的空白方框内输入所需温度,如：40度。并选中它,点击[更多>>] 键,如图所示,选中[与左侧相同]，使柱温箱的温度左右一致。
4.4.4.2 点击[确定]，进入下一画面。
4.4.5 检测器参数设定：检测波长：一般选择zui大吸收处的波长。样品带宽：一般选择zui大吸收值一半处的整个宽度。参比波长：一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域 。参比带宽：至少要与样品信号的带宽相等，许多情况下用100nm作为缺省值。同时可以输入采集光谱方式，步长，范围，阈值。选中所用的灯。
4.4.6 在[ 运行时选项表 ]中选中[ 数据采集]，点击[确定]。
4.4.7 点击[方法]菜单，选中[方法另存为…]，输入一方法名，如[测试]，点击[确定]。
4.4.8 从菜单 [视图]中选中[在线信号],选中[信号窗口1],然后点击[改变…] 钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击[确定]。(如同时检测二个信号,则重复10,选中[信号窗口2]。单击[改变]键，即可弹出右侧的[编辑信号图谱]窗口，进而选择所需的谱图信号。
安捷伦液相色谱仪
4.4.9 从[运行控制]菜单中选择[样品信息]选项，如下图所示，输入操作者名称，如[安装工程师]；在[数据文件 ]中选择[手动]或[前缀/计数器]。区别: 手动--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。 Pr—在前缀/计数器----[前缀]框中输入前缀，在[计数器]框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd数据0001，vwd数据0002……。
4.4.10 点击[确定] ,从[仪器] 菜单选择[系统开启]。
4.4.11 等仪器准备好，基线平稳，用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。
4.5 数据分析方法编辑:
4.5.1 从[视图]菜单中，点击[数据分析]进入数据分析画面。
4.5.2 从[文件]菜单选择[调用信号]，选中您的数据文件名，如下图所示。点击[ 确定]，则数据被调出。
安捷伦液相色谱仪
4.5.3做谱图优化：从[图形]菜单中选择[信号选项]，如下图所示。从[范围] 中选择[满量程] 或[自动量程] 及合适的时间范围或选择[自定义量程] 调整。反复进行，直到图的比例合适为止。点击[ 确定]。
4.6积分:
4.6.1 从[积分]菜单中选择[积分事件]选项，如下图所示。选择合适的[斜率灵敏度]
，[峰宽]，[zui小峰面积]，[zui小峰高]。
液相色谱柱是液相色谱的核心部件，它主要起到了分离作用。色谱柱同样也是一个消耗品，在流动相冲刷的过程和样品在分析的过程，填料损失和污染使得色谱柱的性能慢慢下降。所以，对于液相色谱尤其是常用的C18柱，需要在一定时间内对其性能做一个评估，同样，新的色谱柱也要对色谱柱做一个有效的体检。
液相色谱柱的十大常见故障：
1、若操作过程发现压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。当出现错误警告(各组件指示灯均为红色)，一般为漏液，其中一个感应器中已有溶剂，漏液故障排除后，擦干，点击On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再点击操作界面中的Instrument/System On即可。
2、连接柱子与管线时，应注意拧紧螺丝的力度，过度用力可导致连接螺丝断裂。柱接头处易发生漏液，可能情况为接头Fittings中间的管子未和接口处贴紧。不同厂家的管线及色谱柱头结构有差异，不要混用，必要时可使用PEEK管及活动接头;
3、操作过程若发现压力非常高，则可能管路已堵，应先卸下色谱柱，然后用分段排除法检查，确定何处堵塞后解决。若是保护柱或色谱柱堵塞，可用小流量流动相或以小流量异丙醇冲洗，还可采用小流量反冲的办法(新柱不提倡)，若还是无法通畅，则需换柱;
4、运行过程中自动停泵，可能为压力超过上限或流动相用完;
5、样品瓶中样品较少，自动进样器进样针无法到达液面，可采用调低进样针进样高度的办法，注意设置时不要使进样针碰到瓶底，微量样品分析应使用微量样品瓶;
6、自动进样器进样针未与样品瓶瓶口对准时，需重新定位。
7、泵压不稳或流量不准，可能为柱塞杆密封圈问题或seal wash垫圈问题，需更换;
8、基线产生不规则噪声，可能原因为系统不稳定或没达到化学平衡(使其平衡，若用离子对试剂，在使用使需要足够的时间和溶剂体积，色谱柱才能达到足够的平衡)，流动相被污染(更换流动相，清洗储液器、过滤器，冲洗并重新平衡系统)，色谱柱被污染(为证明可能的原因更换系统的色谱柱或使用一根同类的被证明性能好的色谱柱)，检测器不稳定;
9、短期有规则的噪声，可能原因为泵压不稳或泵脉冲，调节溶剂不适当(如两种溶剂的互溶性问题)，泵入口管路松或堵塞，泵太脏，泵柱塞磨损，检测器不稳定;
10、长期有规则噪声，可能原因为室温不稳(未使用柱温箱)或使用柱温箱不当;
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