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色谱柱峰形后拖尾是什么原因造成的如何挑选购买色谱柱

时间：2020-07-20 来源：仪多多仪器网作者：仪多多商城

　　1.柱物理损坏

　　色谱柱有物理损坏是造成峰形拖尾的根源。的解决方法就是更换新柱。

　　2.柱内填料污染

　　流动相和样品中的杂质是色谱柱主要污染源。

　　流动相所用的各种溶剂至少是分析纯，尽量使用色谱纯试剂。流动相所用的水要是超纯水或全玻璃器皿双蒸水。用前先用0.45um溶剂微孔过滤(器)过滤，除去可能存在的微粒。流动相建议现用现配，对于含盐的溶液尤其注意长置会产生细菌或出现沉淀。此外还得保证储存流动相的容器清洁。

　　复杂样品可选用0.45um溶剂微孔过滤(器)或样品预处理柱对样品进行预处理，确保样品中不含微粒杂质。若样品不便处理，要使用保护柱。柱内填料污染时，可将柱头螺丝卸下，用专用工具挖出柱内前段被污染填料，再以相同的填料重新填入，修复。或以能溶解污染物的流动相按色谱柱使用的相反方向，冲洗色谱柱(约20至30倍柱体积，或视具体情况而定；另外，此时不能接检测器)，将污染物冲出色谱柱，再按色谱柱标明的使用方向使用。

　　3.柱进口处有异物

　　当断定是柱进口处有异物时，可将柱头螺丝卸下，取出滤帽并将其置于20%硝酸溶液中，用超声波清洗约20分钟，再置于超纯水中，并用超声波清洗约10分钟，重新装入色谱柱内即可。

　　4.样品浓度过高致使柱超载

　　样品在柱上超载能引起峰展宽，拖尾(或伸舌)。

　　适当减小进样量或样品浓度(需要时，可提高检测器灵敏度)直至峰形和保留时间不再改变，便可消除这种不良影响。减小进样量还能改善其分离度。正常情况下，样品中每种化合物在150×4.6mm柱中进样量保持在3～50ug范围内，不会引起明显超载。

　　5.样品溶剂不对

　　选择合适的样品溶剂，以排除不必要的干扰。要选用流动相溶解样品。

　　6.柱外效应

　　柱外效应(即进样阀、色谱柱及检测器间的管路过长、直径过粗、管路接头不匹配、有死体积)是影响色谱柱柱效的主要因素之一。所以在可能的条件下，色谱柱的两端连接管路要尽可能短，连接管内径尽可能细小，切口务必平整光滑，尽可能的减小死体积，以防止因样品扩散造成不能反映色谱柱真实柱效等情况发生。

　　7.缓冲不足或不合适

　　在缓冲不好或离子强度过低的分离中，也会出现保留时间重现性差和峰形拖尾。增加缓冲浓度(与样品大小相匹配)能改善此情况。

　　8.硅醇基团作用

　　仔细分析色谱柱内填料表面性质可知：反相色谱柱填料的表面大约被键合相覆盖了一半，其余的就是未被键合的硅醇基团。所谓的保留是指样品分子与键合相相互作用的结果。但是，酸性或碱性化合物与硅胶表面残存的硅醇基团或金属杂质之间相互作用而引起双重保留机理，因此，发生了峰形拖尾。

　　为了减小峰形拖尾，通常可在流动相加入25mM三乙胺(抑制剂)。三乙胺能与硅醇基团发生强烈的相互作用，从而降低或阻断样品分子与硅醇基团的作用，以保证保留机理正常进行，并大大缓解了峰形拖尾。使用长链的硅醇基抑制剂，虽起效较慢，但持续力较三乙胺长。因为抑制剂分子中除了胺基与硅醇基团发生极性作用外，大分子中非极性部分与固定相也会发生反相作用而产生保留现象。如果将抑制剂加至样品中，效果会显著。

　　9.柱内金属污染

　　柱内金属污染(Fe，Ni等)可引起某引些化合物峰形拖尾。金属可由填料本身带进，也可由腐蚀性流动相缓慢溶解柱进口的金属滤片，随流动相沉积到柱填料中。例如C18柱填料被金属污染后，造成酸性/碱性样品拖尾，可用碱洗/酸洗后再键合的填料，得到的峰是尖锐且对称的。

　　【中国仪器网维修保养】色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。当然，色谱柱的正确使用和维护十分重要，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。

　　1、避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。

　　2、应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然，流动相使用前必须经脱气和过滤处理。

　　3、一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。

　　4、选择使用适宜的流动相(尤其是pH)，以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解，压力升高是需要更换预柱的信号。

　　5、避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。

　　6、经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50～75ml。

　　7、避免使用高粘度的溶剂作为流动相；如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净。

　　8、进样样品要提纯。

　　9、严格控制进样量，不要超载。

　　10、每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱，好用洗脱能力强的洗脱液冲洗，例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡。当采用盐缓冲溶液作流动相时，使用完后应用无盐流动相冲洗。含卤族元素(氟、氯、溴)的化合物可能会腐蚀不锈钢管道，不宜长期与之接触。装在HPLC仪上柱子如不经常使用，应每隔4~5天开机冲洗15分钟。

　　11、大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围。

　　12、按说明书保存色谱柱，禁止讲缓冲液留在柱内过夜，注意反相柱不能用纯水长时间冲。

　　13、不建议拆开柱子，自己更换填料。

　　相比较液相色谱柱，感觉气相色谱柱要简单的多，而且，往往气相色谱柱各型号之间的专属也不那么强，往往一个样品用多种色谱柱分析，通过调整温度程序，也可以得到相类似的分析结果。气相色谱柱的进样针数同样也仅供参考，不能作为色谱柱寿命的*参数，影响气相色谱柱的寿命的因素基本为高温、高温时间、样品中的高沸物（包括一些在不适合的方法中，样品的分解或聚合物）、载气纯度等。
　　
　　常规的气相色谱柱通常是石英管表面涂敷的液体填料，所以一般情况下，气相色谱的分离其实是气化后的样品在液体填料里的溶解再挥发的性质不同来实现的。那么既然填料是液体，自然就会挥发了，气相色谱柱的寿命zui大的影响因素就在这里。气相色谱柱都会有一个极限温度，一般使用温度会在这个极限温度下的20度左右。通常气相分析方法是程序升温的，高温的温度和保留时间决定了每一次进样对色谱柱的影响。不过不同类型的色谱柱因为其填料的性质不同，其极限温度也不同，自然zui高使用温度就不同。反过来说，在相同使用温度下，其寿命也不相同。
　　
　　不管什么分析方法都要尽可能的真实反应样品里的溶剂及所有物质的含量，气相色谱分析样品的首要条件是，样品要能被气化，就是进样口温度及程序终温要大于样品的沸点（这也不是的），当样品中有高沸点的物质，甚至是无机盐、机械杂质，不能被气化留在了衬管里，甚至留在了色谱柱中，就会对色谱柱有损伤。这种情况是要处理一下样品，萃取、蒸馏、过滤都是常用的方法。如果实在无法避免，就要经常更换隔垫、石英内衬管等，过一定时间还要把气相色谱柱前段割一段下来，通常是1米左右。除了这些，还应注意对样品性质的了解，如果样品的热稳定性差，进样分析过程中发生了分解或者聚合，产生高沸物就会对色谱柱产生很大影响，如果这些物质不能被溶剂冲洗的话，这种损伤就是不可逆的，而且分析结果也不准确。这种情况下就要适当的降低温度，直到不发生这种反应。或者换其它的分析方法。
　　
　　通常我们使用的载气是高纯氮气，但是，排除经济因素，这并不是一个zui佳的选择。因为氮气的生产就是液态空气蒸发来的，但是因为氮气和氧气性质接近，一般很难杜绝高纯氮气里含有少量的氧气。氧气在高温柱对整个气相色谱系统包括色谱柱都会产生不良影响。所以一般仪器厂家还是建议使用高纯氦，尤其在进行计量、验证等高标准分析时，不过一瓶高纯氦可以换5瓶高纯氮，一般用户还是选择使用高纯氮气。其实从仪器性能来讲，也可以使用高纯氢气作为载气，低含氧量、低背景、低廉的价格都是不错的选择，当然一般考虑到氢气的泄漏以及储运的风险，往往被用户所排除。不过，带TCD检测器的气相色谱往往还是使用高纯氢气作为载气。

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