、准备好工具和所需部件。工具包括扳手、超声清洗器、密封圈安静工具、新密封圈。用水-甲醇冲洗泵，拆开进出口管道，在泵头和单向阀上标出液流方向。
第二、将柱塞杆缩至小，松开泵头的收紧螺钉，小心托住泵头。操作时要注意处处以平衡的动作慢慢退出泵头，切不可摇动或上下左右摆动泵头。
第三、从密封圈孔中轻轻拔出旧密封圈，注意不要化泵头内壁，要毫不犹豫地随即扔掉旧密封圈。
第四、将泵头和新密封圈分别放入甲醇中超声清洗，同时用无纤维纸擦洗柱塞杆。察看柱塞杆上有无划痕，如有划痕应换新柱塞杆然后再安装密封圈，
第五、安装新密封圈。这一步要用专门的安装工具，切不可粗心大意，避免损坏密封圈。
第六、重新装上泵头。先在柱塞杆上滴几滴甲醇以湿润，滑动泵头到位。千万不能摇动或摆动，以防柱塞杆在这一步操作时折断。平衡地上紧固定螺丝，接上进液管道。
后、打脱气甲醇到泵腔中，不断用纸巾从泵出口处吸去流出的液体，等到无气泡一处再接上输出管道，打开放空阀，继续抽20mL甲醇赶走气泡后，换成需要使用的流动相。
液相色谱仪检测器阻塞的现象有：系统压力增高，松开检测器进口的接头压力降至正常水平。检测器部分有三处易发生阻塞，即进口管路、流通池和出口管路。因组设造成压力显著增高，虽然用一般的净化方法去掉阻塞可能不奏效，但值得一试。如用注射器回抽池中的溶剂受到很大阻力，说明阻塞相当严重。若是检测仪器厂商标明池能耐高压，可用泵反冲，这样常可去掉阻塞压力，注意压力不要超过6MPa~7MPa。标准池一般耐压在3~5MPa左右，不可用此法。 用以上方法试验不能成功疏通检测器通道阻塞时，可将流通池从检测器中拆下来，将进口管路卸下，用泵方向冲洗。然后再冲洗出口管路。如果进出口管路都是通畅的，那么就是流通池本身阻塞。 进口管路是最易发生堵塞的地方，用小径的管路可以挡住进入检测器的微粒。但有下列情形者在进口处可发生堵塞： 1、自己填装的柱在出口处留下填料微粒； 2、修复柱时逆向反冲时间不够就接到检测器上； 3、逆向反冲时原柱头密封性能不好，填料漏出。 如果堵塞循环发生，应在柱和检测器之间装一个没有死体积的在线过滤器。拆下进口管路反接到泵上反冲，可以疏通堵塞。 对一些顽固性阻塞而又不能从池上拆开的管路，可以从管路进口处切掉大约1~2cm长的管子。当然这是一种无可奈何的选择，因为每次操作后会使得管子变短，还涉及到换刃环接头等，还可能会因为切口不平整、密封不严等造成渗漏。 若用以上方法都不能疏通疏通进口管路，应考虑更换新管子或请厂商修理。出口管路阻塞，也可参照上述方法进行处理。
液相色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝（封头）与柱填料等组成。
柱管：
多用不锈钢制成，若果使用时柱压不高于70 kg/cm2时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。用于柱填料的装填。
压帽：
即色谱柱两端套合于柱管端外壁的塑性圆柱帽，中部有小孔，多为聚四氟乙烯制成，用于固定筛板。
密封环：
位于接头螺旋环内壁的弹性环，多为聚四氟乙烯制成，用于色谱柱两端压帽与柱外壁的密封。
色谱柱使用前注意事项。
色谱柱在使用前，最hao进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最jia条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
但要注意：
柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。
1、样品的前处理
a、最hao使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45μm或0.22?m的过滤膜过滤除去微粒杂质。
2、流动相的配制
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：
a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
b、流动相与样品不产生化学反应
c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最hao使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
3、流动相流速的选择
因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。
对于一根特定的色谱柱，要追求最jia柱效，最hao使用最jia流速。
对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml／min为佳。
当选用最jia流速时，分析时间可能延长。
可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
注意：
a．含水流动相最hao在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜。最hao加入die氮化钠，防止细菌生长。
b．流动相要求使用0.45 μm或0.22m滤膜过滤，除去微粒杂质。
c．使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能。
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