说到混合型液相色谱柱,它是一种能够发生多种相互作用模式的色谱柱,作为色谱分离的核心,在目前的液相色谱分析中发挥着重要的作用。混合模式的色谱柱也是种类繁多,有双重混合模式的,也有三重混合模式的。双重混合模式包括:反相+阳离子交换,反相+阴离子交换,反相+HILIC等。三重混合模式包括:反相+阳离子交换+阴离子交换,HILIC+阳离子交换+阴离子交换等。
混合模式色谱柱由于其多种优点,实验人员在分离复杂样品时,越来越多的被使用到实验中,赛默飞拥有的三重混合模式Trinity系列色谱柱在单次运行中可同时分离离子和疏水性分析物,消除了更换色谱柱,使用离子对或使用多种色谱填料的需要。
来来来
我们来隆重介绍一下Acclaim Trinity系列色谱柱。Acclaim Trinity系列均为三重混合模式的色谱柱。又分为P和Q两个系列,均采用纳米微球-硅胶杂化技术,一个颗粒上集成了三种分离模式。P系列色谱柱可以同时分离阳离子、阴离子和非极性化合物。Q系列先卖个关子~
图1. 纳米微球-硅胶杂化技术
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新型Nanopolymer Silica Hybrid(NSH)技术在对以下物质分离时可以获得无可比拟的色谱性能:
01 | 原料药和反离子 |
02 | 药物反离子的筛选 |
03 | 酸性和碱性原料药及各自反离子的混合物 |
04 | 酸性、碱性和中性原料药的混合物 |
图2. Trinity P1柱和Trinity P2柱对比
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使用与维护
当次使用新的色谱柱时,在进行任何进样之前,应采用流动相进行彻底冲洗(例如,在推荐的流速,大约使用 20 柱体积)。
当切换到新的流动相时, 确保新的流动相与色谱柱中以前的流动相相容,以避免由于沉淀造成色谱柱堵塞。在进行任何进样(例如 20 个柱体积)之前,应完全调节色谱柱。
使用色谱柱前,需要把系统里置换为含有盐的水相和有机相。保证色谱柱一直在带有缓冲盐的体系下使用,是对色谱柱较好的维护。
色谱柱清洗
对于磷酸盐缓冲液中使用的 3.0 mm 内径色谱柱:
1
在 0.3 mL/min 流速时,使用 5 个柱体积的 20 mM 磷酸钠(或钾)缓冲液, pH 值 6 / 乙腈 v/v 50/50 清洗色谱柱。
2
在 0.3 mL/min 流速时,使用 20 个柱体积的 100 mM 磷酸钠(或钾)缓冲液, pH 值 6 / 乙腈 v/v 90/10 清洗色谱柱(以强力清除滞留的离子物)。
3
在 0.3 mL/min 流速时,使用 5 个柱体积的 10 mM 磷酸钠(或钾)缓冲液, pH 值 6 / 乙腈 v/v 50/50 清洗色谱柱。
4
在 0.3 mL/min 流速时,使用 20 个柱体积的 10 mM 磷酸钠(或钾)缓冲液, pH 值 6.4 / 乙腈 v/v 20/80 清洗色谱柱(以强力清除滞留的疏水污染物)。
5
使用至少 20 个柱体积流动相平衡色谱柱。
典型应用
图3. Trinity P1柱分析氯酸盐和高氯酸盐
图4.Trinity P1同时分离药物反离子
图5.Trinity P2柱分析药物相关阴离子和阳离子
您在日常的实验过程中用的色谱柱有没有寿命过短的问题?不但实验成本攀升,实验效果都没法保证。我们今天就邀请月旭科技的工程师来为您解答有关色谱柱使用寿命的相关问题,助您的柱子“益寿延年”!
为什么检测该项目使用不同品牌的色谱柱,寿命均在100针左右?
1)有可能的原因是样品组分吸附在色谱柱的前段。可能是由于样品在流动相中的溶解度低而沉淀出来的,也有可能是强吸附,或是样品本身与填料表面发生微弱的不可预知的化学反应。样品溶液本身的pH值在色谱柱的耐受临界值附近,而且进样体积较大(内径4.6mm,上样体积在50ul以上)对柱头端的填料影响比较大,通常这样的情况伴随柱压升高。
解决方法:选择合适的样品前处理技术,去除掉强保留物质。使用保护柱,尽量选择与分析柱同种填料,同种键合方法的保护柱。如果使用不同品牌的填料、装填工艺的保护柱,在分离能力和保护分析柱方面可能得不到好的效果。也不要使用更大粒径的保护柱,更大粒径或者装填较差的保护柱会因为它的峰展宽作用而导致分离能力下降。
2)键合相脱落变性。色谱条件多方作用导致寿命短,这是目前的色谱技术不能解决的,一般情况下小基团键合相更容易被水解而脱落。流动相中盐浓度越高,越容易引起水解。这种情况下,就只能重新开发色谱条件。
为什么该品牌的色谱柱一直很好,就这一支寿命异常短?
确定一下使用频率、冲洗频率、流动相的更换频率、流动相的试剂品牌、纯度等是否和之前一样,如果有更换,那寿命有差异是正常现象。如果都与之前相当,那需要检查这支色谱柱是否受过剧烈震荡,比如:不小心摔过,或者运输过程中受过剧烈震荡,建议与厂家的技术人员沟通。
为什么使用该品牌的支色谱柱用于方法建立时寿命长,方法建立后,开始进行方法验证时,却觉得寿命短?
这种情况的发生,很大的原因是,前期建立方法时,并不是连续做项目,而是不停地更换流动相。这就意味着色谱柱的冲洗频率比较高,而更换的流动相的清洁度也是比较好的。建立方法的时候很难连续进样多次,有时候甚至一周才做一次项目,这样就会产生支柱子使用时间更久的错觉。而方法建立后,做方法验证,流动相固定下来,就会一次性配置较大体积的流动相,这样流动相较易变质,有时肉眼不能直接分辨。而且会连续多次过夜进样,这样对色谱柱的冲洗也不是很及时。这些都是可能导致色谱柱寿命变短的因素。