安捷伦液相色谱仪常见问题及相应的解决方法:
一、安捷伦液相色谱仪常见问题——柱压高
原因分析以及解决办法:
(1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内。先用40~50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下 降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟。
(2)样品污染沉积。由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,换成甲醇冲洗,接着用甲 醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子,再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,zui后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。
二、安捷伦液相色谱仪常见问题——不稳定
原因分析以及解决办法:
原因:系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。
解决办法:处理工作中注意观察流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。
三、安捷伦液相色谱仪常见问题——指示
原因分析以及解决办法:
(1)泵密封垫圈磨损。更换密封垫圈
(2)大量气泡进入泵体。在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。
四、安捷伦液相色谱仪常见问题—— 重复性差
原因分析以及解决办法:
(1)进样阀漏液。更换进样阀垫圈
(2)加样针不到位。保证加样针插到底,注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态 转换到INJECT状态,以保证进样量的准确。
(3)液量不足。
五、安捷伦液相色谱仪常见问题——峰分叉
原因分析以及解决办法:
(1)色谱柱被污染。先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的 长短由样品污染的情况而定),再换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,zui后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。
(2)柱头填料塌陷。拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料),装入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用与柱内径相同的顶端平滑的不锈 钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧反复几次,直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净,擦净柱外壁的填料,拧紧柱头,用纯甲醇冲洗30分钟以上。
液相色谱柱的结构:
1、空柱由柱接头、柱管及滤片组装而成。
柱接头采用低死体积结构,柱接头是两端螺纹组件,一端是为7/16英寸外螺纹,另一端是3/16英寸的内螺纹(国内外已规范化)。7/16英寸外螺纹与1/4英寸柱管(Φ6.35mm)连接,中间放置压坏用于密封。3/16英寸的内螺纹与1/16英寸(Φ1.57mm)的连接管连接,中间也放置压环用于柱接头的密封。为了尽量减少柱外死体积,在安装色谱柱时,用Φ1.57mm连接管通过空心螺钉压环后要尽量插到底,然后再拧紧空心螺钉。压环被空心螺钉挤压变形后紧箍在连接管上(连接管通过压环后露出的管长度应严格控制在2.5mm长或其他固定尺寸)。
在两端柱接头内,柱管两端各放置一片不锈钢滤片(或滤网),用于封堵柱填料不被流动相冲出柱外而流失。空柱各组件均为316#不锈钢材质,能耐受一般的溶剂作用。但由于含氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀。
2、柱填料:
液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的,柱子的分类是依据填料类型而定。
正相柱:多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种,其颗粒直径在3—10?m的范围内。另一类正相填料是硅胶表面键合—CN,-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。
反相柱:主要是以硅胶为基质,在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。
常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等,其颗粒粒径在3—10?m之间。
液相色谱从开始的流动相瓶到结束的废液瓶之间,其流通管路是全封闭的,虽然内部压力很高,但色谱仪的外部不会出现一滴液体。如果出现了漏液现象,系统一般会发出报错信号,无法正常工作。对于操作人员来说,漏液是一件让人苦恼的事情,因为有些漏液问题比较直观,容易解决,但有些漏液问题比较复杂,需要深入排查。
一、接头处漏液
接头处漏液一般发生在色谱柱接头处,此处的漏液现象比较直观,一般是液体积流在色谱柱头,造成压力波动。通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题,就必须将接头取下,检查是否损坏(例如,卡套损坏、密封表面有杂质);损坏的接头应该更换掉。
二、进样阀漏液
1、转子密封圈磨损太厉害或者损坏,造成密封不严。拆下六通阀,检查转子密封圈,可单独购买,根据说明书自行安装更换。如果定子磨损比较严重的话,有必要也需更换。
2、废液管产生虹吸或者堵塞,造成废液逆流。此时需要保持废液管高于废液液面,或者更换、疏通废液管,保证废液排放正常。
3、进样口密封松动或者进样针头尺寸不合适。需要调整进样口的密封圈或者更换合适的进样针头。
三、泵漏液
泵头漏液一般都是由于密封不好引起的,需要检查相关接口处的密封状况。
1、单向阀、接头松动。这是首先要排查的项目,但单向阀和接头也不能拧得过紧,避免磨损。
2、柱塞杆磨损刮伤或者柱塞密封垫损坏导致的柱后漏液,这是zui常见的问题,此情况一般会出现以下三种现象,一是柱塞杆磨损导致与密封圈之间有微小缝隙;二是柱塞杆与密封圈不匹配;三是泵头紧固螺钉没有拧紧。在确定拧紧的情况下,需要更换柱塞杆或柱塞密封垫。
3、比例阀损坏。首先检查手紧接头,如有损坏,则立即更换;再检查隔膜,如果发现漏液则立即更换。
四、检测器漏液
1、 流通池垫片损坏,造成漏液。在使用过程中避免过大的压力,拆开流通池,检查垫片,损坏严重时需要更换垫片。
2、 废液管破裂。在人为外力的作用下,废液管受到挤压造成破裂,打开检测池,检查管路,如果破裂,需更换。
3、流通池阻塞。当流通池阻塞时,其内部压力升高,可能会造成池子窗口破裂,此时需要清洗流通池,有必要时需要更换流通池或者池子窗口。