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液相色谱法测定乙蒜素的含量 液相色谱常见问题解决方法

时间:2020-07-24    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     

   乙蒜素为我国S创绿色农药,是一种植物仿生农药,可抑制粮油、棉花、蔬菜、花卉、药材、茶叶等作物以及蚕业、渔业的数十种病菌。杀菌效果优越、活性稳定、与植物亲和力强,容易被作物吸收,快速杀灭病菌且易降解,不易产生抗性。

  乙蒜素目前已广泛应用于防治水稻烂秧病、恶苗病、稻瘟病、白叶枯病;麦类黑穗病、条纹病;棉花枯萎病、黄萎病;果树轮纹病、炭疽病;作物苗期立枯病、猝倒病、烂根病等。乙蒜素还能刺激作物生长、壮根壮苗。随着科技的发展和人们对乙蒜素认识的不断提高,乙蒜素的使用范围将会不断扩大,用量日增,市场前景广阔。

   本文采用反相液相色谱法,使用C18反相柱和紫外可见光检测器,对乙蒜素原药中有效成分进行定量分析,得到良好结果。该方法具有操作简单、准确度高、重现性好等特点,能为乙蒜素的生产质量控制和分析方法提供参考。

仪器准备

 

仪器简介

    LC-600A智能全控液相色谱系统由P600高压恒流泵与UV600紫外检测器直接构成等度分析系统。使用WS600工作站可以同时控制数台P600高压恒流泵、UV600紫外检测器及恒温柱箱等,实行多元高压洗脱、波长扫描等功能。

 

应用领域

化合物检测、法医毒物分析、蛋白质组学食品检测、药物分析、环境分析、聚合物分析

 

谱条件:

 

色谱柱

Promosil-C18(150mm×4.6mm,5μm)

检测波长

210nm

流动相

乙腈-水(30:70,V/V)

流速

  1.0mL/min

 进样量

 5μL


 

测定结果

    液相色谱等度系统气泡故障排除
    现象描述:
    1. 故障原因:溶剂混合时,由于两种液体热力学体积的变化,会产生气泡;混合时放热或者吸热易产生气泡,比如:甲醇和水混合属于放热,乙腈和水混合属于吸热。通常用量筒混合后明显看到体积的增减,而且有许多小气泡产生,挂在瓶壁上,或者晃一下可以看到许多小气泡存在液体中。
    故障排除:对溶剂过滤,超声脱气(常用),尤其是乙腈和水混合后,超声脱气时间要长一些,也可以通过其他方法脱气,例如安装在线脱气机,充氮脱气等。处理好的液体在使用过程中应该保持室内温度恒定。
    2. 故障原因:溶剂滤头污染,导致泵在吸液过程中吸力不均匀而强制吸液从而产生微小的真空气泡。此时会观察到进液管壁上分布许多很小的气泡,有的在动有的停留在管壁上,或者感觉流速比设定值小,压力也不稳。
    故障排除:先观察现象确认,再排除。 用5%—10%的稀硝酸浸泡过夜(怕超声的滤头)或者超声处理数小时(可以超声的滤头),然后用纯水浸泡过夜或者超声处理,注意换水多处理几次,洗掉酸的残留,后用有机相甲醇浸泡处理或者超声即可。若上述处理未果,需更换新的溶剂滤头。
    3. 故障原因:流动相放好后,没有排气,就开始运行泵,易产生气泡。
    故障排除:放好流动相后,打开旁通阀,用注射器慢慢吸液,观察进液管无气泡后再吸10ml将流路中的空气驱赶干净,旋紧旁通阀后再运行泵,或者是打开旁通阀大流速排液,观察进液管无气泡后,再排气2min将流路中的空气驱赶干净,旋紧旁通阀后再运行泵。
    4. 故障原因:单向阀或者泵头内部污染。(泵的压力波动一般在100psi以上就要考虑了)泵头是压力变化剧烈的地方,也是易产生气泡的地方,泵头靠负压而吸液,而负压必然使流动相中的小气泡长大,当泵腔变正压时,已长大的气泡未必能全部变小流入后续液路,则泵腔内将积存气泡,从而影响吸液精度。
    故障排除:小心拆下泵头,用甲醇超声清洗单向阀以及内部密封圈和泵头整体,用棉花沾甲醇擦拭柱塞杆。必要时更换单向阀,密封圈,柱塞杆等。
    5. 故障原因:进样时带入气泡,吸样时带到进样针中气泡
    故障排除:在进样前,注意排出进样针里的空气,将进样针头垂直向上,用手指垫上滤纸摁住针头处,往上推,气泡很容易就上去了,排出即可。
    6. 故障原因:色谱柱进气泡
    故障排除:用纯甲醇低流速(0.2-0.3ml/min)长时间冲洗反相色谱柱,随后可逐步加大流速,加到1ml/min,直至色谱柱压力稳定。或者更换色谱柱。
    7. 故障原因:流通池是易积存气泡的地方,其对基线影响较大,流动相流入色谱柱后,压力越来越小,微小气泡将逐渐长大,而流通池截面积相对较大,则气泡在池内易长大,在无外压的情况下,很难缩小到管路内径以下流出流通池,从而存在了池内,导致基线很乱。
    故障排除:在废液出口处加反压调节器(压力一般在150psi左右),为流通池提供一个背压;其次是用手指堵废液管出液端,眼看泵柱压上升(约2-3s),松开,且同时看检测器显示屏上吸光度值的变化。如果池内有气泡,则手指堵废液管,吸光度值将剧烈变化,当手松开后吸光度值再次大步上升,证明池内有气泡但没有排掉,当手指堵住和松开废液管时,吸光度值基本不变时,证明排汽泡成功,再观察基线将稳定(此过程需要重复10-20次)。

液相色谱柱填装程序

  液相色谱柱、特别是高效液相色谱柱的填装,需要有较高的技巧和熟练的技能。因此,有人甚至将“装柱”看作是“艺术加技术”。但是,只要掌握了一些基本的规律和方法,任何实验室都可以填装出具有较高柱性能的色谱柱。当然,目前大多数实验室多是购买商品预填装柱来满足分离、分析之需。但是在一些有特殊需要的情况下,或为节省经费,在实验室中自行填装高效液相色谱柱还是可取的。

  液相色谱柱填装程序中应该注意的问题:

  ①高压操作的安全问题。常发生的问题是柱子与匀浆罐连接不牢,造成加压时柱头被高压冲下或柱子从匀浆罐上滑脱。此时,轻则填装失败,材料损失,重则造成人身伤害事故,一定要加以防范。除每次填装前均须仔细确认是否连接正确且牢靠外,可以还可加上由法兰盘和长螺杆组成的预防脱落装置,以防万一。

  ②通常,先填装的柱床较后填装的柱床紧密。因此,当使用时宜以相反的方向为宜,即让近匀浆罐一端作为使用时流动相的出口,而填装时的出口端则作为流动相的入口。

  ③新柱子使用前应以甲醇冲洗20-30min, 后,再改用流动相平衡。

  ④新柱子宜选适宜的标准样品进行评价并记录,以备存查和比较。

标签: 液相色谱柱
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