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你知道液相色谱漏液原因与解决办法吗 液相色谱常见问题解决方法

时间:2020-07-24    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     

液相色谱从开始的流动相瓶到结束的废液瓶之间,其流通管路是全封闭的,虽然内部压力很高,但色谱仪的外部不会出现一滴液体。如果出现了漏液现象,系统一般会发出报错信号,无法正常工作。对于操作人员来说,漏液是一件让人苦恼的事情,因为有些漏液问题比较直观,容易解决,但有些漏液问题比较复杂,需要深入排查。

 

一、接头处漏液

 

接头处漏液一般发生在色谱柱接头处,此处的漏液现象比较直观,一般是液体积流在色谱柱头,造成压力波动。通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。但值得注意的是过份拧紧会导致金属接头的漏液和塑料接头的磨损。如果通过稍微拧紧接头不能解决漏液的问题,就必须将接头取下,检查是否损坏(例如,卡套损坏、密封表面有杂质);损坏的接头应该更换掉。

 

二、进样阀漏液

 

1、转子密封圈磨损太厉害或者损坏,造成密封不严。拆下六通阀,检查转子密封圈,可单独购买,根据说明书自行安装更换。如果定子磨损比较严重的话,有必要也需更换。

 

2、废液管产生虹吸或者堵塞,造成废液逆流。此时需要保持废液管高于废液液面,或者更换、疏通废液管,保证废液排放正常。

 

3、进样口密封松动或者进样针头尺寸不合适。需要调整进样口的密封圈或者更换合适的进样针头。

 

三、泵漏液

 

泵头漏液一般都是由于密封不好引起的,需要检查相关接口处的密封状况。

 

1、单向阀、接头松动。这是首先要排查的项目,但单向阀和接头也不能拧得过紧,避免磨损。

 

2、柱塞杆磨损刮伤或者柱塞密封垫损坏导致的柱后漏液,这是zui常见的问题,此情况一般会出现以下三种现象,一是柱塞杆磨损导致与密封圈之间有微小缝隙;二是柱塞杆与密封圈不匹配;三是泵头紧固螺钉没有拧紧。在确定拧紧的情况下,需要更换柱塞杆或柱塞密封垫。

 

3、比例阀损坏。首先检查手紧接头,如有损坏,则立即更换;再检查隔膜,如果发现漏液则立即更换。

 

四、检测器漏液

 

1、 流通池垫片损坏,造成漏液。在使用过程中避免过大的压力,拆开流通池,检查垫片,损坏严重时需要更换垫片。

 

2、 废液管破裂。在人为外力的作用下,废液管受到挤压造成破裂,打开检测池,检查管路,如果破裂,需更换。

 

3、流通池阻塞。当流通池阻塞时,其内部压力升高,可能会造成池子窗口破裂,此时需要清洗流通池,有必要时需要更换流通池或者池子窗口。

 

 

 

 

  液相色谱柱是液相色谱的核心部件,它主要起到了分离作用。色谱柱同样也是一个消耗品,在流动相冲刷的过程和样品在分析的过程,填料损失和污染使得色谱柱的性能慢慢下降。所以,对于液相色谱尤其是常用的C18柱,需要在一定时间内对其性能做一个评估,同样,新的色谱柱也要对色谱柱做一个有效的体检。

  液相色谱柱的十大常见故障:

  1、若操作过程发现压力很小,则可能管件连接有漏,注意检查。当出现错误警告(各组件指示灯均为红色),一般为漏液,其中一个感应器中已有溶剂,漏液故障排除后,擦干,点击On line操作界面中的Instrument/System Off,然后再点击操作界面中的Instrument/System On即可。

  2、连接柱子与管线时,应注意拧紧螺丝的力度,过度用力可导致连接螺丝断裂。柱接头处易发生漏液,可能情况为接头Fittings中间的管子未和接口处贴紧。不同厂家的管线及色谱柱头结构有差异,不要混用,必要时可使用PEEK管及活动接头;

  3、操作过程若发现压力非常高,则可能管路已堵,应先卸下色谱柱,然后用分段排除法检查,确定何处堵塞后解决。若是保护柱或色谱柱堵塞,可用小流量流动相或以小流量异丙醇冲洗,还可采用小流量反冲的办法(新柱不提倡),若还是无法通畅,则需换柱;

  4、运行过程中自动停泵,可能为压力超过上限或流动相用完;

  5、样品瓶中样品较少,自动进样器进样针无法到达液面,可采用调低进样针进样高度的办法,注意设置时不要使进样针碰到瓶底,微量样品分析应使用微量样品瓶;

  6、自动进样器进样针未与样品瓶瓶口对准时,需重新定位。

  7、泵压不稳或流量不准,可能为柱塞杆密封圈问题或seal wash垫圈问题,需更换;

  8、基线产生不规则噪声,可能原因为系统不稳定或没达到化学平衡(使其平衡,若用离子对试剂,在使用使需要足够的时间和溶剂体积,色谱柱才能达到足够的平衡),流动相被污染(更换流动相,清洗储液器、过滤器,冲洗并重新平衡系统),色谱柱被污染(为证明可能的原因更换系统的色谱柱或使用一根同类的被证明性能好的色谱柱),检测器不稳定;

  9、短期有规则的噪声,可能原因为泵压不稳或泵脉冲,调节溶剂不适当(如两种溶剂的互溶性问题),泵入口管路松或堵塞,泵太脏,泵柱塞磨损,检测器不稳定;

  10、长期有规则噪声,可能原因为室温不稳(未使用柱温箱)或使用柱温箱不当;

  保留时间是指溶质通过色谱柱所需时间,即待测组分从进样到出现峰大值所需的时间。保留时间是由色谱过程中的热力学因素所决定,在一定的色谱操作条件下,任何一种物质都有一确定的保留时间,有着类似于比移值相同的作用,可作为色谱定性分析的依据。换言之,如果保留时间出现漂移问题,那么检测结果也会随之受到影响。
 
  保留时间重现是液相性能好坏的一个重要标志,同一种东西,两次的保留时间相差不要超过15s,超过了半分钟可看做保留时间漂移,就无法进行定性。这里小编就列举几个保留时间漂移的的原因和解决方法。
 
  1色谱柱平衡
 
  如果观察到保留时间漂移,首先应考虑色谱柱是否已经平衡。在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。通常平衡需要10~20个柱体积的流动相,但如果在流动相中加入少量添加剂(如离子对试剂)则需要相当长的时间来平衡色谱柱。流动相污染也可能是原因之一。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上,从而造成保留时间的漂移。应注意:水是很容易污染的流动相成分。
 
  2固定相稳定性
 
  固定相的稳定性都是有限的,即使在推荐的pH范围内使用,固定相也会慢慢水解。例如,硅胶基质在pH4时水解稳定性好,水解速度与流动相类型和配体有关。双官能团配体和三官能团配体比单官能团配体的键合相要稳定;长链键合相比短链键合相稳定;烷基键合相比氰基键合相稳定的多。经常清洗色谱柱亦会加速色谱柱固定相的水解。其他硅胶基质键合相在水溶液环境中也可以发生水解,如氨基键合相等。
 
  3色谱柱污染
 
  保留时间漂移的另一个常见原因是色谱柱污染。HPLC色谱柱是非常有效的吸附性过滤器,它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。污染源可以是:流动相本身,流动相容器,连接管、泵、进样器和仪器密封垫,以及样品等。通常通过实验可判断污染的来源。样品中如果存在色谱柱上保留很强的组分,就可能是使保留时间漂移的潜在根源。这些根源通常是样品基质,如:配药中的赋形剂,生化样品(如血清)中的蛋白及类脂类化合物,食品样品中的淀粉,环境水样中的腐殖酸等。通常样品中的强保留组分具有较高的分子量,在此情况下,保留时间漂移的同时或其后会有反压的增加,可以通过使用固相提取( SPE)等样品前处理方法来去除样品基质的影响,避免色谱柱污染简单的方法是防患于未然。相比之下,找到问题的所在并设计有效的清洗步骤以去除污染物要困难的多。通常使用在给定色谱条件下的强溶剂,但并非所有污染物都可以在流动相中溶解。如THF可去除反相色谱柱中的许多污染物,但蛋白在THF中就不能溶解, DMSO常常用于去除反相色谱柱中的蛋白。使用保护柱是个非常有效的方法。反冲色谱柱仅是不得已时采用的办法。
 
  4流动相组成
 
  流动相组成的缓慢变化也是保留时间漂移的常见原因。如流动相中易挥发组分的挥发及循环使用流动相等,应防止流动相由于蒸发、反应等等原因造成的变化。
 


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