一、液相色谱仪峰分叉怎么回事?
造成这种情况的原因一般是色谱柱被污染，或柱头填料塌陷导致的。
对于*种情况，先用纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定)，再换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，zui后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳，则考虑第二种情况。
对于第二种情况，拧开柱头，检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料)，装入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧，再填平，滴甲醇，再压紧反复几次，直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净，擦净柱外壁的填料，拧紧柱头，用纯甲醇冲洗30分钟以上。
二、如何排除液相色谱仪气泡溢出的故障?
流动相内产生都无法清除不断产生的气泡，主要是因为过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内，过滤器内部由于霉菌的生长繁殖，形成菌团，阻塞了过滤器，缓冲液难以流畅地通过过滤器，空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。
过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时，轻轻震荡几次，再将过滤器用纯水清洗几次，打开泄压阀，打开purge键清洗脱气，如仍有气泡不断从过滤器冒出，继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，如没有气泡不断从过滤器中冒出，说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏，流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀，打开泵，流速调至1.0～3.0ml/min，纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀，纯甲醇冲洗半小时即可。
三、自检时，为什么有时会出现“钨灯能量低”的错误?
一般来说，原因是系统中有挡光物，光路偏离，钨灯电源系统或钨灯灯泡已坏。这时首先要检查光度室是否有挡光物;打开检测器光源室盖，检查氘灯是否点亮;如果氘灯不亮，则关机，更换新氘灯，换时，需注意型号;检查氘灯保险丝，看是否松动、氧化、烧断;如果故障，应立即更换;再开机重新自检;若仍出现上述故障，则重新安装软件后再进行自检。
四、出现压力波动大，流量不稳定该怎么办?
造成这种情况的原因是系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物，使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量，保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底，避免吸入空气，流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物，拆下单向阀，放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。
五、液相色谱仪峰面积重复性不好怎么回事?
主要原因可能有进样阀漏液、加样针不到位或液量不足。针对*种情况，处理时应对更换进样阀垫圈;对于第二种情况保证加样针插到底，注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态，以保证进样量的准确。日常工作中，液相色谱仪的保养非常重要，如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中，储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液，每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净，防止无机盐析出或沉积;样品的前处理也很重要，任何样品都要尽可能地去除杂质，完全溶解，尽量减少对色谱柱的污染，以延长色谱柱的使用寿命，同时避免注射过浓的样品溶液，以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞;色谱柱作好标记，用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。
六、液相色谱仪液相色谱柱压升高的原因是什么?
造成柱压升高的原因很多。一般是由于柱床内产生了异常的占位性物体，造成流体阻力加大所引起的。例如，缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内，或样品污染沉积。针对*种情况，处理时应先用40～50℃的纯水，低速正向冲洗柱子，待柱压逐渐下降后，相应提高流速冲洗，柱压大幅度下降后，用常温纯水冲洗，之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于第二种情况，由样品的沉积引起污染的C18柱，和纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定)，再用换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，zui后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。
液相色谱仪的日常维护与注意事项
一、日常维护：
1.定期清洗单向阀：将单向阀卸下，一般先用纯净水超声10分钟，然后用异丙醇超声，10分钟；也可直接用异丙醇超声10分钟。
2.定期清洗吸滤头：将吸滤头卸下，一般先用纯净水超声10分钟，然后用异丙醇超声10分钟；也可直接用异丙醇超声10分钟。
3.定期冲洗检测池：把色谱柱卸下，在流速1.0ml/min的状态下先用纯净水冲洗30分钟，然后再用30%
磷酸（色谱级）冲洗30分钟左右，再用超纯水冲洗至流出液为中性，最后用甲醇冲洗，待用。
二、注意事项：
1.开始进样前30分钟开氘灯即可，节约灯的能量和使用时间。
2.流动相的使用和注意事项：
①所用流动相必须预先滤过和脱气，流动相一般贮存于玻璃不锈钢容器内。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化。磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用，不要长期贮存。容器应定期清洗，特别是盛水、缓冲液和混合溶液的瓶子，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。
②配制流动相用水需为娃哈哈牌纯净水或经超声过滤后的纯化水，流动相配制好后先用直径为5cm，孔径为0.45ｕm的滤膜，通过沙芯过滤器的过滤，然后在超声仪上超声。
③不得将装流动相的容器直接放置与超声仪内，需放与筛网上进行超声。
3.六通阀的使用和维护注意事项：
①样品溶液进样前必须用滤膜过滤，以减少微粒对进样阀的磨损。
②转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置，否则流动相受阻，使泵内压力剧增，甚至超过泵的最大压力；再转到进样位时，过高的压力将使柱头损坏。
③为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中，每次分析结束后应冲洗进样阀。通常可用水冲洗，或先用能溶解样品的溶剂冲洗，再用水冲洗。
4.色谱柱柱压升高的主要因素：
①LC-10AT/20AT/10ATPlus泵的单向阀堵塞。
②色谱柱的入口筛板堵塞。
③吸滤头堵塞。
④PEEK管接口处堵塞。
5.色谱柱柱压不稳的因素：
①泵内有空气。
②泵密封垫损坏。
③溶剂中的气泡。
④系统检漏，找出漏点。
6.样品峰保留时间漂移的主要因素：
①室内温度变化过大。
②流动相成分发生变化。
③色谱柱未平衡好。
④泵中有气泡。
⑤该流动相是否适宜此样品的检测。
7.基线漂移的主要因素：
①柱温波动。
②流动相不均匀。
③流通池被污染或有气体。
④检测器出口阻塞。
⑤流动相配比不当或流速变化。
⑥流动相污染、变质。
⑦使用循环溶剂。
8.检测器灵敏度不够的主要因素：
①样品进样量不足。
②波长设置不正确。
③检测器池窗污染。
④检测池中有气泡。
⑤电压不稳。
⑥流动相流速不合适。
9.色谱柱的使用和维护注意事项：
①避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。
②应逐渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。
③一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。
④选择使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破坏。
⑤避免将复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。
⑥经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。
⑦保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置至次日或更长时间。
⑧色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗；另一种可能是大分子进入柱内，使柱头被污染；如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。
⑨以硅胶为基质的填料，只能在pH2~9范围内使用。每次分析检测完成后，可以用洗脱能力强的洗脱液冲洗，例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡。
10.样品必须用直径为2.5cm，孔径为0.45ｕm的滤膜针式过滤。如有明确要求需用离心过滤的，经离心过滤后取上清液即可。
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