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如何延长液相色谱柱的使用寿命 液相色谱常见问题解决方法

时间:2020-08-31    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     

如何延长液相色谱柱的使用寿命


1.使用”保护柱”,能够延长色谱柱的使用寿命。简单的说,”保护柱”即是很短的色谱柱,填装和所使用液相色谱柱相同的填料。正确使用装在液相色谱柱前面的”保护柱”,可以阻拦一些容易损坏液相色谱柱的物质。而达到延长柱子寿命的效果。如果使用”保护柱”不当。会造成反效果。因为在保护柱使用过程中。如污染达到一定程度而没有及时更换,累积的杂物很可能会冲入色谱柱中,反而会造成色谱柱损坏。因此。使用”保护柱”时,较为重要的是要知道什幺时候该换保护柱。该换的时候就必须要立即更换。
     2.选择高品质的柱子,并注意使用方法;可以延长柱子的使用寿命。一般认为同一厂牌、同一型号的柱子之间的品质都相同,对品质管理很严格的厂家而言,这说法是成立的。但如果厂家品质管理不够严格,即使是同一批号的新柱子之间的品质也有差异。所以,选用柱子时必须选择管理严格的高品质柱子,我们知道,任何柱子使用过后都会产生变化。尤其如在强酸或强碱条件下使用,柱子更易产生变化。因此,应尽量选用pH适用范围大的柱子。在开发新分析方法时,许多专家建议不要使用旧柱子。因柱子一经使用。柱性会改变;如此一来,使用旧柱子开发出来的新分析方法,很可能在再使用同厂牌的新柱子分析时。发生无法达到预定效果的情况。总的说。开发新分析方法时要使用品质好的新柱子;并且一支柱子可以使用在一种分析方法上;则柱子寿命可以延长。
    3.定期冲洗柱子可以延长柱子使用寿命。我们知道柱子使用一段时间后总会有一些杂质累积在柱内。这些杂质不会随着流动相出来,自然会逐渐影响柱子的品质。这些杂质在后来的分析谱图上出现。而造成出现怪峰、基线不平等现象。简单的解决方法是用较强的流动相冲洗。可以是在每次分析某一产品完成后冲洗。如果分析时使用缓冲剂时﹐可以用水来取代缓冲剂。先使用有机和水的混合溶液为流动相冲洗缓冲剂。接着再用100%有机溶剂冲洗。如果不先用有机和水的混合溶液冲洗,而直接用100%有机溶剂冲洗的话,缓冲剂很可能会沉淀出来,而损坏柱子的品质。使用10-20倍柱体积的量来冲洗基本就足够了。专家建议可以将100%有机溶剂冲洗的条件加在分析实验程序完毕地最后,如此一来每天在开机前都会用100%机溶剂冲洗。一般硅胶柱可以反冲洗处理﹐即是在将冲洗前将柱子倒反接后再冲洗。打算使用反冲洗处理前,可以先参考柱子的保养说明书。所以要真正保护柱子,使柱子的寿命延长,可以是使用”保护柱”和定期冲洗柱子

  安捷伦液相色谱仪的规范操作
 
  1. 目的:明确安捷伦液相色谱仪的规范操作,确保数据的准确性。
 
  2. 范围:适用于安捷伦液相色谱仪
 
  3. 职责:检验人员对此负责。
 
  4. 操作规程:
 
  4.1 系统组成
 
  本系统由1个溶剂二元输送泵(分主/A泵和副/B泵)、手动进样阀、柱温箱、检测器、化学工作站和电脑等组成。
 
  4.2 安捷伦液相色谱仪准备
 
  4.2.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相,用合适的0.45μm滤膜过滤,超声脱气20min。
 
  4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱(柱进出口位置应与流动相流向一致)和定量环。
 
  4.2.3 配制样品和标准溶液(也可在平衡系统时配制),用合适的0.45μm滤膜过滤。
 
  4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常
 
  4.1 将待测样品按要求前处理,准备HPLC 所需流动相,检查线路是否连接完好,废液瓶是否够用等。
 
  4.3安捷伦液相色谱仪开机:
 
  4.3.1 打开计算机,进入中文Windows XP画面,并运行CAG Bootp Server程序。
 
  4.3.2 打开 1200 LC 各模块电源。
 
  4.3.3 待各模块自检完成后,双击[Instrument 1 Online]图标,化学工作站自动与1200LC
 
  通讯,进入的工作站画面如下所示。
 
  4.3.4 从[视图]菜单中选择[方法和运行控制]画面, 点击[视图]菜单中的[显示顶部 工具栏], [ 显示状态工具栏],[系统视图],[样品视图],使其命令前有[√]标志,来调用所需的界面。
 
  4.3.5 把流动相放入溶剂瓶中。
 
  4.3.6 打开冲洗阀。
 
  4.3.7 点击[泵]图标,点击[设置泵…]选项,进入泵编辑画面。
 
  4.3.8 设流速:5ml/min,点击[确定]。
 
  4.3.9 点击[泵] 图标,点击[控制…]选项,选中[启动],点击[确定] ,则系统开始冲洗,直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止,切换通道继续冲洗,直到所有要用通道无气泡为止。
 
  4.3.10 点击[泵] 图标,点击[控制…]选项,选中[关闭],点击[确定]关泵, 关闭冲洗阀。
 
  4.3.11 点击[泵]图标,点击 [设置泵…选项],设流速:1.0ml/min。
 
  4.3.12 点击泵下面的瓶图标,如下图所示(以单元泵为例),输入溶剂的实际体积和瓶体积。 也可输入停泵的体积,点击[确定]。
 
  4.4 安捷伦液相色谱仪的数据采集方法编辑
 
  4.4.1开始编辑完整方法:从[方法]菜单中选择[编辑完整方法…] 项,如下图所示选中除[数据分析 ]外的三项,点击[确定],进入下一画面。 4.4.2方法信息
 
  4.4.2.1在[方法注释]中加入方法的信息(如:测试方法)。 4.4.2.2 点击 [确定], 进入下一画面。 4.4.3 泵参数设定
 
  4.4.3.1 在[流速]处输入流量,如1ml/min,在[溶剂 B]处输入80.0,(A=100-B) ,也可[插入 ]一行[时间表] ,编辑梯度。在[压力限]处输入柱子的zui大耐高压,以保护柱子。
 
  4.4.3.2 点击[确定],进入下一画面。
 
  4.4.4 柱温箱参数设定
 
  4.4.4.1 在[温度]下面的空白方框内输入所需温度,如:40度。并选中它,点击[更多>>] 键,如图所示,选中[与左侧相同],使柱温箱的温度左右一致。
 
  4.4.4.2 点击[确定],进入下一画面。
 
  4.4.5 检测器参数设定:检测波长:一般选择zui大吸收处的波长。样品带宽:一般选择zui大吸收值一半处的整个宽度。参比波长:一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域 。参比带宽:至少要与样品信号的带宽相等,许多情况下用100nm作为缺省值。同时可以输入采集光谱方式,步长,范围,阈值。选中所用的灯。
 
  4.4.6 在[ 运行时选项表 ]中选中[ 数据采集],点击[确定]。
 
  4.4.7 点击[方法]菜单,选中[方法另存为…],输入一方法名,如[测试],点击[确定]。
 
  4.4.8 从菜单 [视图]中选中[在线信号],选中[信号窗口1],然后点击[改变…] 钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击[确定]。(如同时检测二个信号,则重复10,选中[信号窗口2]。
 
  单击[改变]键,即可弹出右侧的[编辑信号图谱]窗口,进而选择所需的谱图信号。 4.4.9 从[运行控制]菜单中选择[样品信息]选项,如下图所示,输入操作者名称,如[安装工程师];在[数据文件 ]中选择[手动]或[前缀/计数器]。区别: 手动--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。 Pr—在前缀/计数器----[前缀]框中输入前缀,在[计数器]框中输入计数器的起始位,仪器会自动命名,如vwd数据0001,vwd数据0002……。
 
  4.4.10 点击[确定] ,从[仪器] 菜单选择[系统开启]。
 
  4.4.11 等仪器准备好,基线平稳,用试样溶液清洗注射器,并排除气泡后抽取适量。
 
  4.5 安捷伦液相色谱仪的数据分析方法编辑:
 
  4.5.1 从[视图]菜单中,点击[数据分析]进入数据分析画面。
 
  4.5.2 从[文件]菜单选择[调用信号],选中您的数据文件名,如下图所示。点击[ 确定],则数据被调出。
 
  4.5.3做谱图优化:从[图形]菜单中选择[信号选项],如下图所示。从[范围] 中选择[满量程] 或[自动量程] 及合适的时间范围或选择[自定义量程] 调整。反复进行,直到图的比例合适为止。点击[ 确定]。
 
  4.6安捷伦液相色谱仪积分:
 
  4.6.1 从[积分]菜单中选择[积分事件]选项,如下图所示。选择合适的[斜率灵敏度]
 
  ,[峰宽],[zui小峰面积],[zui小峰高]。 当液相色谱仪出现故障时我们如何自检?

    液相色谱仪在人们的生活中占有很大一部分,但是由于没有认真的看说明书,导致一些操作上的问题,使液相色谱仪的使用寿命变短,那到底出现故障我们改怎么解决呢,这篇文章就是针对这个问题来进行讨论的。

    1、气泡溢出

    流动相内有气泡,关闭泵,打开泄压阀,打开purg键,清洗脱气,气泡不断从过滤器冒出,进入流动相,无论打开purge键几次,都无法清除不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12~36小时,轻轻震荡几次,再将过滤器用纯水清洗几次,打开泄压阀,打开purge键清洗脱气,如仍有气泡不断从过滤器冒出,继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏,流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀,打开泵,流速调至1.0~3.0ml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀,纯甲醇冲洗半小时即可。

    2、峰面积重复性不佳

    (1)进样阀漏液。

    (2)加样针不到位。

    (3)液量不足。处理对于第一种情况更换进样阀垫圈;对于第二种情况保证加样针插到底,注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态,以保证进样量的准确。日常工作中,液相色谱仪的保养非常重要,如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中,储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液,每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净,防止无机盐析出或沉积;样品的前处理也很重要,任何样品都要尽可能地去除杂质,完全溶解,尽量减少对色谱柱的污染,以延长色谱柱的使用寿命,同时避免注射过浓的样品溶液,以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞;色谱柱作好标记,用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。

    3、柱压高原因

    (1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内。

    (2)样品污染沉积。处理对于第一种情况先用40~50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。

    4、既无压力指示,又无液体流过

    (1)泵密封垫圈磨损。

    (2)大量气泡进入泵体。处理对于第一种情况,更换密封垫圈;对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。

    5、压力波动大,流量不稳定

    原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。

    6、出峰不佳,峰分叉

    (1)色谱柱被污染。

    (2)柱头填料塌陷。处理对于第一种情况,先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳,则考虑第二种情况。对于第二种情况,拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料),装入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧反复几次,直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净,擦净柱外壁的填料,拧紧柱头,用纯甲醇冲洗30分钟以上。

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