色谱柱清洗与再生
除非特殊说明，在所有情况下，所用溶剂的体积应该是色谱柱体积的40-60倍。
应在清洗过程开始和结束时各测一次柱效和容量因子等，比较色谱柱性能的改善，以确定清洗的效果。
确保色谱柱中没有样品和缓冲溶液，清洗前所用的溶剂应与最初清洗时所用的溶剂相溶。
应确保实验测试时所用的流动相与色谱柱中最后的溶剂相溶。
1.正相填料
用四氢呋喃冲洗。
用甲醇冲洗。
用四氢呋喃冲洗。
二氯甲烷冲洗。
用无苯正己烷冲洗。
2.反相填料
用HPLC级水冲洗，冲洗时进4等份的200μl的二甲亚砜（DMSO）。
用甲醇冲洗。
用氯仿冲洗。
用甲醇冲洗。
3.阴离子交换填料
用HPLC级水冲洗。
用甲醇冲洗。
用氯仿冲洗。
4.阳离子交换填料
用HPLC级水冲洗；在冲洗的过程中进4等份200μl的DMSO
四氢呋喃冲洗。
5.蛋白质凝胶过滤填料
去除蛋白质尺寸排阻介质中的污染物有两种清洗/再生的方法。
弱保留蛋白质
用30moL/L pH3.0磷酸盐缓冲液冲洗。
强保留蛋白质
用100%的水到100%的乙腈梯度洗脱60min。
6.多孔石墨化碳
多孔石墨碳有四种再生的方法，选用哪一种方法依赖于被分析物和所用的溶剂。
酸碱再生
适合于使用极性流动相分析离子类分析物。
将色谱柱倒装
用50ml含0.1%三氟乙酸的四氢呋喃／水(1:1)溶液1ml/min流速冲冼。
用50ml含0.1%三乙胺或氢氧化钠的四氢呋喃／水(1:1)溶液1ml/min流速冲冼。
用50ml含0.1%三氟乙酸的四氢呋喃／水(1:1)溶液1ml/min流速冲冼。
用95%甲醇水溶液冲洗重新平衡。
将色谱柱改为正向。
强有机溶剂再生
适合于水相分析极性或离子类分析物。
用50ml丙酮以1ml/min流速冲洗。
用120ml二丁醚以1ml/min流速冲洗。
用50ml丙酮以1ml/min流速冲洗。
用水冲冼至平衡。
正相再生
适合于主要使用正相流动相的多孔石墨化碳柱。
用50ml二氯甲烷以1ml/min流速冲洗。
用50ml甲醇以1ml/min流速冲洗。
用50ml水以1ml/min流速冲洗。
用50ml 0.1mol/L盐酸以1ml/min流速冲洗。
用50ml水以流速1ml/min冲洗。
用50ml甲醇以1ml/min流速冲洗。
用50ml二氯甲烷以1ml/min流速冲洗。
用流动相冲冼至平衡。
三氟乙酸的去除
适合于流动相中含有三氟乙酸的多孔石墨化碳柱。
用加热到75℃的乙腈冲洗，同时色谱柱也要保持在这一温度。
凝胶过滤色谱柱用于体积排阻层析
体积排阻，也叫凝胶过滤,根据物质尺寸大小的不同分离。如果分子的尺寸大于树脂的最大孔径，这种分子就不能进入树脂颗粒内部，它所经过的有效体积最小，最先从洗脱液中流出。而小分子能够进入树脂的孔道中，经过的有效体积比较大，从洗脱液中流出较晚，分子量越小，流出越晚。
体积排阻层析可以用于纯化的第一步，按分子量大小将产品粗分；也可以用作纯化的中间步骤来改换缓冲液或脱盐，或用于纯化的最后一步来去除杂质，精制产品。
体积排阻层析树脂有预先设定的排阻极限，排阻极限由树脂本身的最大孔径和孔径分布范围决定。MKF有机凝胶型大孔填料规格有：7-10μm超细颗粒，具有很高的分辨率；20μm，40μm中等颗粒，用于制备型的纯化步骤；60-80μm较粗颗粒，用于经济型制备的纯化步骤；100-150μm粗颗粒，用于产物的大规模捕获。
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色谱柱老化注意事项装填好的色谱柱连接在高效气相色谱仪上后，先试压和试漏，然后在恒温下用载气吹洗数小时，再进行分析，此过程称为色谱柱老化。
一、色谱柱老化的目的：
1、任何制作好的新柱，在色谱柱涂渍过程中难免柱内残留有机溶剂，任何固定液都有低沸点的不纯物，不经老化就用于分析，上述低沸点物质大量从柱中流出，会造成基线不稳，有时还会污染检测器。
2、促使固定液均匀牢固地分布在载体和色谱柱内壁，提高柱分离效能，消除不良影响。
3、促使色谱柱内固定相排布更加紧凑和均匀，提高柱性能并使其稳定。
装填好的色谱柱经过老化后，柱效和性能稳定了，才可使用。
二、色谱柱老化注意事项：
1、新制作好的色谱柱老化时一定不能接检测器，否则容易污染检测器。
2、老化温度应高于分析使用温度25℃以上，但不能超过固定液允许的最高使用温度。
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