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液相色谱柱堵塞解决总汇 液相色谱常见问题解决方法

时间:2020-08-31    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     

柱子轻微堵塞,

 

安捷伦C18 4.6*250mm,以前用纯甲醇,1ml/min,压力为55-56BAR左右,可是现在压力上升为70BAR左右,有物质在色谱柱当中没有被冲出来,峰型比以前也胖了点。有什么好的解决办法,降低柱压,提高色谱柱柱效。

柱子堵塞了,一般可以用哪些溶剂冲?

甲醇,乙醇,二氯甲烷,四氢呋喃,异丙醇,可以吗?

1、先把柱子卸下来看看柱压,如果压力升高是柱子引起的处理柱子,如果柱子卸下来柱压还是挺高那么就不是你的柱子的柱压高,而是别的地方有堵塞。柱子柱压高时可以先用含水比例较大的系统冲一下,要是系统中有盐析出而导致的柱压升高时这样应该可以使柱压适当的降低;冲完后若柱压还是没有降低可用适当比例的异丙醇冲洗,利用异丙醇的粘度冲出系统中的析出物质。

2、将柱子反接,用10%~90%的甲醇冲洗,10%几甲醇保留10倍柱体积,90%至少保留10倍柱体积。冲完后用50:50=乙腈:异丙醇冲洗至少10倍柱体积。可以在甲醇和水中考虑加入0.1%的甲酸。我也碰到过这种情况,就这样冲了大概半天,好了。幸亏安捷伦的柱子还可以,不然柱子早报销了。

3、首先,你应该确定一下你的柱子用了多长时间,柱子在使用的过程中柱压逐渐升高是正常的现象,你的柱子柱效也在下降,有可能是正常的使用损坏,首先使用甲醇-水梯度洗脱几个小时,如果没有效果,可尝试倒过来用甲醇-水梯度冲洗,一般可以解决。

4、第一要检查是柱子的原因还是系统的原因,可以换跟新的柱子试试或者在另一台液相上用你的柱子测一下压力,从而可以检查是哪个出了问题。

第二如果是柱子那就用甲醇低速冲洗。

第二如果是系统的问题可能是有沉淀的无机盐,可以换上二通,用60°的水把系统冲洗。

第三柱效低可以用甲醇和乙腈换着冲洗,注意要低速,可以在一定程度上提高柱效。

建议一般要准备一根状态较好的柱子作为备用,可以在出问题时进行检查。

以上回答希望能有帮助。

5、首先要确定柱压高是柱子的原因,而不是系统其他原因;

如果确定是柱子原因,建议用异丙醇冲下试试;

"峰型比以前也胖了点",可能是你的柱子柱效有所下降。

6、不光要看你的流动相,还要看看你的样品做什么,生物样品还是普通样品,要是生物样品建议用乙腈冲洗看看,虽然现在乙腈的价格是飙涨,要是还有盐的样品也还是要用高比例的水冲洗的。

异丙醇建议用比例低点的水溶液即可,异丙醇的黏度非常大,压力会比较高,不要用太大的流速。

反冲的问题不到最后一步不要用,对柱子还是有一定的损伤的。

7、柱压高有许多原因,要是柱子里有脏东西,可以用甲醇多冲没也可以将柱子反接用甲醇冲洗。还可以先超声一下,再冲洗。要看具体的原因了。

8、进样管路堵塞:卸下进样阀和柱子之间那根细管丝,放入异丙醇中(浸没),超声1小时以上。

柱子堵塞:用异丙醇,低流速,低压力,倒着冲洗。

9、用甲醇和乙腈冲一段时间·····十几个小时再看看

实在不行就把前端柱子拆开挖掉一点填料,建议以后用的时候可以用一个预柱,这样柱子一般不会出问题了。

10、柱压高时,冲柱子千万要注意,不用二氯甲烷,含氯的溶剂的比重大,容易破坏柱子里的结构,还有能用甲醇就不要用乙腈冲,因为纯乙腈冲新柱子还可以,如果是根老柱子,时间长了,纯乙腈容易对管道有溶解作用,造成柱压不稳,我用的岛津以前就是这样,咨询了岛津的工程师才发现可以少用纯乙腈的。

  【仪器网 使用手册】常见液相色谱法按其分离原理可以分为液-固吸附色谱法、正相液-液分配色谱法、反相液-液分配色谱法、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法。以下对这几种液相色谱法进行简介:
 
  1.液相色谱法:在液固吸附色谱法中,流动相为液体,并使用固体吸附剂,被分离组分在色谱柱上分离原理是根据固定相对组分吸附力不同进行分离的,其分离过程是一个吸附—解吸附的平衡过程。目前,液固吸附色谱法较常用于非离子型化合物,用于分离同分异构体。
 
  2.液-液分配色谱法:在液液分配色谱法中,流动相与固定相都是液体,按照固定相和流动相之间互不相溶进行测试。同时,按照其极性不同分为正相液液色谱法以及反相液液色谱法。其中正相液液分配法的流动相极性小于固定相极性;反相液液分配色谱法中则是选用极性较大的流动相与极性较小的流动相。
 
  3.离子交换色谱法:在离子交换色谱法中,固定相是离子交换剂,常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架,在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基或季氨基。被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换,根据各离子与离子交换基团具有不同的电荷吸引力而分离。目前,离子交换色谱法主要用于分析有机酸、氨基酸、多肽及核酸。
 
  4.离子对色谱法:在离子对色谱法中,固定相与流动相都为液体,是液液色谱法的分支,是根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后,在非极性固定相中溶解度增大,从而实现分离的色谱法。主要用于分析离子强度大的酸碱物质。
 
  5.分子排阻色谱法:在分子排阻色谱法中,固定相是有孔径的多孔性填料,流动相是可以溶解样品的溶剂。小分子量的化合物可以进入孔中,滞留时间长;大分子量的化合物不能进入孔中,直接随流动相流出,分子排阻色谱法利用分子筛对分子量大小不同的各组分排阻能力的差异而完成分离。目前,分子排阻色谱法常用于分离高分子化合物。
 
  上述根据液相色谱法分离原理,对其各类型进行归纳简述,内容并不全面,欢迎补充。   1、出峰不佳,峰分叉
  
  (1)色谱柱被污染。
  
  (2)柱头填料塌陷。处理对于*种情况,先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,zui后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳,则考虑第二种情况。对于第二种情况,拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料),装入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧反复几次,直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净,擦净柱外壁的填料,拧紧柱头,用纯甲醇冲洗30分钟以上。
  
  2、柱压高原因
  
  (1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内。
  
  (2)样品污染沉积。处理对于*种情况先用40~50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,zui后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。
  
  3、压力波动大,流量不稳定
  
  原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。
  
  4、既无压力指示,又无液体流过
  
  (1)泵密封垫圈磨损。
  
  (2)大量气泡进入泵体。处理对于*种情况,更换密封垫圈;对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。

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